一株產(chǎn)赤蘚糖醇酵母的鑒定及其赤蘚糖還原酶基因的克隆與分析.pdf

1、赤蘚糖醇(Erythritol),即1,2,3,4-丁四醇(C4H10O4),具有甜味純正、熱量值低、穩(wěn)定性高、耐受量高等性質(zhì),在食品、醫(yī)藥、化妝品、化工等多個領(lǐng)域都具有廣闊的應用前景。目前工業(yè)化生產(chǎn)赤蘚糖醇的主要方法是采用酵母發(fā)酵。本研究圍繞著前期分離出的一株產(chǎn)赤蘚糖醇酵母——菌株 BH010展開,探討了其培養(yǎng)特性、形態(tài)學特征以及生理生化特征,根據(jù)rDNA序列對其進行鑒定,并克隆了其赤蘚糖還原酶基因。
　　在30％葡萄糖、1%酵

2、母膏培養(yǎng)基中,30℃,150rpm,搖瓶培養(yǎng)8d,用高效液相色譜法分析發(fā)酵液的組分,結(jié)果表明菌株 BH010的主要發(fā)酵產(chǎn)物為赤蘚糖醇,此外還有少量副產(chǎn)物,包括甘油和核糖醇。采用掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),在液體培養(yǎng)基中細胞呈現(xiàn)橢圓形,細胞平均大小約5×10μm,單個或者多個呈鏈狀排列,細胞頂端有出芽現(xiàn)象,而在固體培養(yǎng)基中則觀察到長條狀的假菌絲,假菌絲頂端有鈍圓形的芽生分生孢子。此外,還通過糖發(fā)酵、碳源同化、氮源同化等試驗探討了生理生化特征。

3、
　　采用PCR的方法擴增出菌株BH010的18S rDNA、26S rDNA D1/D2區(qū)和ITS/5.8S rDNA三段序列,Genbank登錄號分別為:JQ798179,JQ798180和JQ798181;利用BLAST軟件做同源性分析,結(jié)果表明菌株 BH010屬于叢梗孢屬(Moniliella),并將其命名為Moniliella sp. BH010。
　　赤蘚糖還原酶是酵母赤蘚糖醇合成途徑中的關(guān)鍵酶。本研究采用PCR

4、方法擴增出菌株 BH010的兩段赤蘚糖還原酶基因序列,Genbank登錄號分別為JQ798182和JQ798183,同時還擴增出其對應的cDNA序列。將DNA和cDNA序列進行對比分析,結(jié)果表明菌株 BH010的兩段赤蘚糖還原酶基因中均有內(nèi)含子存在。根據(jù)赤蘚糖還原酶基因序列,推導出對應的氨基酸序列,進行多重比對,結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株 BH010的兩種赤蘚糖還原酶與 Trichosporonoides megachiliensis SNG-42的