甘薯二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)基因的克隆與功能分析.pdf

1、花青素是自然界分布最廣，種類(lèi)最豐富的色素之一，在植物、藻類(lèi)及藍(lán)細(xì)菌中都有重要的生理功能。紫心甘薯因富含花青素，有極強(qiáng)的抗氧化、抑制癌腫及延緩衰老的功能，在食品、醫(yī)藥和化妝品行業(yè)也有著巨大應(yīng)用潛力，其花青素合成酶關(guān)鍵基因的研究是目前最受關(guān)注的研究領(lǐng)域之一。本研究分析了不同基因型紫甘薯在不同生育期花青素含量的變化;同一基因型甘薯在遮蔭、地膜覆蓋處理后花青素含量的變化;克隆了花青素合成酶關(guān)鍵基因DFR(ibDFR)的全長(zhǎng)cDNA，并利用半定量

2、RT-PCR方法分析了ibDFR在不同處理下的mRNA表達(dá)情況，結(jié)果具體如下:
　　 1.濟(jì)薯18的花青素含量在生育期前期較低，35-65d間增加迅速，以后均維持在比較穩(wěn)定的水平，變化很小;通過(guò)遮蔭進(jìn)行弱光處理后，花青素的含量明顯降低;用地膜覆蓋處理后，花青素的含量增加明顯。
　　 2.根據(jù)其它作物的二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)基因的保守序列設(shè)計(jì)引物，利用RT-PCR方法從甘薯塊根中分離出花青素合成相關(guān)基因DFR基因，

3、并定名為ibDFR。該基因在基因庫(kù)的登錄號(hào)為:EU360845，全長(zhǎng)1232bp，編碼398aa。氨基酸序列分析表明，與牽牛相似系數(shù)達(dá)85％，與煙草的相似系數(shù)達(dá)67％，與馬鈴薯的相似系數(shù)達(dá)75％。將ibDFR連接到原核表達(dá)載體pET30a(+)中，檢測(cè)其在大腸桿菌中的表達(dá)，SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ibDFR蛋白質(zhì)分子量大小與推算一致，能在大腸桿菌中轉(zhuǎn)錄表達(dá)。
　　 3.采用半定量RT-PCR方法，分析ibDFR的mRNA在濟(jì)