滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)在腫瘤細(xì)胞檢測(cè)及分子邏輯門(mén)體系中的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著生存環(huán)境的不斷惡化，腫瘤和金屬離子污染已經(jīng)嚴(yán)重威脅到人類(lèi)的健康?；瘜W(xué)發(fā)光分析法因其操作方便、靈敏度高、設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，受到越來(lái)越多科研工作者的廣泛關(guān)注。本論文研制了兩種新型適體生物傳感器，分別應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的高靈敏度檢測(cè)和微量金屬離子的檢測(cè)，本文所建立的方法具有高選擇性、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，在環(huán)境保護(hù)、臨床研究、體外診斷等方面具有十分廣泛的應(yīng)用前景。本論文主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　一、金屬離子觸發(fā)滾環(huán)復(fù)制放火反應(yīng)以及它在分子邏輯門(mén)體

2、系中的應(yīng)用
　　Hg2+能使錯(cuò)配的T-T堿基對(duì)形成穩(wěn)定的T-Hg2+-T堿基對(duì)，Ag+能使錯(cuò)配的C-C堿基對(duì)形成穩(wěn)定的C-Ag+-C堿基對(duì)，這些特性為用于金屬離子檢測(cè)的分子機(jī)器的組裝和邏輯門(mén)體系的執(zhí)行提供了一種新型通用的技術(shù)平臺(tái)。首先，將探DNA與引物DNA雜交，然后，加入Hg2+或Ag+，在連接酶的作朋下將模板DNA連接成環(huán)，然后在DNA聚合酶和dNTPs作用下進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制放大反應(yīng)，用標(biāo)記有熒光素的分子信標(biāo)與滾環(huán)復(fù)制的產(chǎn)物雜交，

3、連接上大量的信號(hào)探針，大大增強(qiáng)了產(chǎn)物的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)Hg2+、Ag+金屬離子的高靈敏度檢測(cè)，同時(shí)，由于Hg2+、Ag+與T-T、C-C堿基對(duì)之間的特異性結(jié)合，也使得本實(shí)驗(yàn)具有良好的選擇性。
　　二、滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)在腫瘤細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用
　　基于生物條形碼納米技術(shù)和滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞適體識(shí)別功能，我們提出了一種高靈敏度的檢測(cè)Ramos細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光成像方法。首先，把引物和環(huán)狀DNA雜交，然后在Klenow聚合酶和