MCM2檢測細胞增殖性在結直腸腫瘤診斷中的應用研究.pdf

1、[目的]1探索大腸癌、大腸腺瘤及正常大腸粘膜組織中MCM2的分布表達情況。2利用Realtime-PCR技術精確定量MCM2-mRNA在大腸癌及大腸腺瘤組織、正常大腸粘膜組織中的表達差異，為進一步細致分析結直腸細胞不同突變階段MCM2的表達，打下實驗基礎。 [方法]150例大腸癌組織、大腸腺瘤及正常組織分別選取自四川大學華西醫(yī)院胃腸外科2004年9月-2004年12月手術患者及門診纖維腸鏡患者，其中癌12例、腺瘤33例、正常組織

2、5例，術后均經病理證實，組織標本實時保存于-150℃冰箱內。2免疫組織化學(ImmunohistochemistyIHC)：根據抗原抗體特異性結合反應，采用羊抗人MCM2抗體，通過免疫組織化學方法，從蛋白水平定位檢測大腸腺癌、大腸腺瘤及正常大腸粘膜組織中MCM2抗原的存在及表達部位。3熒光定量PCR(RealtimequantitativePCR)：定量檢測大腸腺瘤、大腸腺癌及正常大腸粘膜中MCM2-mRNA的表達，Trizol試劑分別

3、從大腸腺癌、大腸腺瘤及大腸粘膜正常組織中提取總RNA，用MCM2的特異引物;上游引物：5’-CACATCGAGTCCATGATCC-3’下游引物：5’-CAAAAGTCTTGCGCATGCT-3’進行逆轉錄聚合酶鏈式反應，從mRNA水平定量檢測MCM2在大腸腺瘤及大腸腺癌、正常大腸粘膜組織中的表達差異。 [結果]1免疫組織化學方法可見在正常大腸粘膜組織中MCM2棕黃色信號顆粒表達在腺泡凹底部的1/3至1/2部分，在腺泡的頂部則無

4、表達，而在大腸腺瘤及大腸癌組織則呈全層腺泡上皮的表達，大腸腺瘤及大腸癌組織中MCM2表達部位并無差異性。2通過Realtime-PCR方法(45個循環(huán))從大腸癌及大腸腺瘤組織中檢測到160bp目的基因片段，但兩者表達的量有差異，大腸腺癌組表達均數(shù)為(X=31.5833)而大腸腺瘤組均數(shù)為(X=16.6061)經統(tǒng)計學分析MCM2在兩者表達量的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004P＜0.05)。 [結論]1增殖特異性抗原MCM2在正常