雪豆和花蕓豆酯酶分離純化與農(nóng)藥敏感性研究.pdf

1、農(nóng)藥在中國(guó)農(nóng)業(yè)發(fā)展中發(fā)揮著及其重要的作用，但農(nóng)藥的不合理使用導(dǎo)致農(nóng)藥殘留日益突出。因此研制出簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快速的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)是我國(guó)的當(dāng)務(wù)之急。本研究對(duì)雪豆和花蕓豆酯酶進(jìn)行分離純化，并研究?jī)煞N植物酯酶的酶學(xué)特性，最后測(cè)定兩種植物酯酶對(duì)23種農(nóng)藥的敏感性。研究結(jié)果如下：
　　1.雪豆和花蕓豆酯酶最適反應(yīng)濃度分別為0.33μg/mL和0.45μg/mL，最佳反應(yīng)溫度為40℃，最適反應(yīng)pH為6.5，乙酸-1-萘酯為最適底物，對(duì)毒扁豆堿和

2、雙（4-硝基苯基）磷酸酯敏感性較高，米氏常數(shù)Km值分別為0.085mmol/L和0.119mmol/L。
　　2．選用離子交換和凝膠過濾純化技術(shù)對(duì)兩種植物酯酶進(jìn)行純化，雪豆和花蕓豆酯酶的比酶活分別提高了56倍和41倍，酶活回收率分別為45.75％和41.53%。
　　3.采取凝膠電泳 SDS-PAGE對(duì)雪豆和花蕓豆純化酶進(jìn)行分析和分子量的確定，得出比較明顯的蛋白條帶，得到雪豆和花蕓豆酯酶的相對(duì)分子量約為26kDa。
　

3、　4.在16種有機(jī)磷農(nóng)藥中，雪豆酯酶對(duì)農(nóng)藥敵敵畏、久效磷、辛硫磷、敵百蟲、三唑磷、丙溴磷、甲胺磷、毒死蜱、樂果、氧樂果相對(duì)較敏感，對(duì)農(nóng)藥馬拉硫磷、乙酰甲胺磷、殺螟硫磷、莎蜱磷、草銨磷敏感性相對(duì)較低，而對(duì)殺撲磷則不敏感。在7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥中，雪豆酯酶對(duì)農(nóng)藥滅多威、克百威、殘殺威、涕滅威相對(duì)較敏感，對(duì)農(nóng)藥抗牙威、殺蟲單、丁硫克百威的敏感性則相對(duì)較低。
　　5.雪豆酯酶在經(jīng)過純化后整體上對(duì)8種有機(jī)磷農(nóng)藥的敏感性略有提高，IC50值在

4、10-6~10-8mol/L范圍內(nèi)。雪豆酯酶純化前后對(duì)敵百蟲、毒死蜱、氧樂果的敏感性提高了約2倍，對(duì)久效磷的敏感性提高了約4倍，對(duì)辛硫磷、三唑磷、樂果、敵百蟲的敏感性基本未提高。4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘殺威、滅多威、涕滅威、克百威對(duì)雪豆酯酶純化前后的半抑制濃度 IC50值在10-6~10-7mol/mL范圍內(nèi)。經(jīng)過純化得到的雪豆酯酶，使得酶對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)藥敏感性基本有所提高，對(duì)克百威的敏感性提高了約4倍，對(duì)涕滅威的敏感性提高了約3倍，對(duì)

5、滅多威的敏感性提高了約2倍，對(duì)殘殺威的敏感性基本未提高。
　　6.在16種有機(jī)磷農(nóng)藥中，花蕓豆酯酶對(duì)農(nóng)藥敵敵畏、久效磷、辛硫磷、敵百蟲、三唑磷、丙溴磷、甲胺磷、毒死蜱、氧樂果、殺螟硫磷、乙酰甲胺磷相對(duì)較敏感，對(duì)農(nóng)藥馬拉硫磷、樂果、莎蜱磷、感性相對(duì)較低，而對(duì)草銨磷、殺撲磷則不敏感。在7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥中，花蕓豆酯酶對(duì)農(nóng)藥滅多威、克百威、殘殺威、涕滅威相對(duì)較敏感，對(duì)農(nóng)藥抗牙威、丁硫克百威的敏感性則相對(duì)較低，而對(duì)殺蟲單則不敏感。

6、>　　7.8種有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)花蕓豆酯酶純化前后半抑制濃度IC50值在10-6~10-8mol/L范圍內(nèi)。經(jīng)過純化得到的花蕓豆酯酶，敏感性略有提高。花蕓豆純化酶敵敵畏、久效磷、辛硫磷、氧樂果的敏感性提高了約2倍，對(duì)三唑磷、毒死蜱、樂果、敵百蟲敏感性變化比較小。4種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘殺威、滅多威、涕滅威、克百威對(duì)花蕓豆酯酶純化前后半抑制濃度IC50值都在10-6~10-8mol/L范圍內(nèi)。經(jīng)過純化得到的花蕓豆酯酶，使得酶對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)藥敏感