農(nóng)藥靶標乙酰膽堿酯酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、乙酰膽堿酯酶是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的酶系之一，在中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中與乙酰膽堿(ACh)受體一起參與完成神經(jīng).神經(jīng)及神經(jīng).肌肉突觸之間動作電位的傳遞，其主要生理功能是催化水解陽離子性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿。目前，天然產(chǎn)物活性物質(zhì)中，研究最清楚的是AChE的酯動部位抑制劑毒扁豆堿，以其為模板合成的氨基甲酸酯類農(nóng)藥，已經(jīng)成為農(nóng)藥生產(chǎn)上一種主要殺蟲劑，有機磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶(AChE)有強烈的抑制作用，主要是它們能夠與AChE的活性

2、部位快速不可逆地結(jié)合，使酶失活，從而引起中毒，起到殺蟲的作用。因此，提取分離純化害蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶并用于天然產(chǎn)物農(nóng)藥體外篩選乃至高通量篩選是研制新一代農(nóng)藥十分有效的方法。本文主要對粗酶液的提取條件進行了研究，采用了Sephadex G-25層析，DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析和SephacrylS-200凝膠過濾層析，對鱗翅目模式生物昆蟲家蠶的頭部粗酶提取液中的乙酰膽堿酯酶進行純化及純化前后酶學(xué)性質(zhì)研究，

3、實驗結(jié)果表明家蠶頭部乙酰膽堿酯酶的粗酶最適提取緩沖液條件為：1％Trition X-100，pH 8.0。在堿性pH條件下發(fā)現(xiàn)了底物(ATChI)的自身水解現(xiàn)象，出現(xiàn)在反應(yīng)體系pH值大于8.5之后。純化后得到的樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和SDS-PAGE檢測均為一條帶，用SDS-PAGE法測得其分子量為77.8 kDa。酶的最適反應(yīng)溫度為37℃，最適pH為7.5，對底物碘化硫代乙酰膽堿(ATChI)的Km值為0.392 mmo