農藥靶標乙酰膽堿酯酶的分離純化及性質研究.pdf

1、乙酰膽堿酯酶是昆蟲神經系統(tǒng)中最重要的酶系之一，在中樞及外周神經系統(tǒng)中與乙酰膽堿(ACh)受體一起參與完成神經.神經及神經.肌肉突觸之間動作電位的傳遞，其主要生理功能是催化水解陽離子性神經遞質乙酰膽堿。目前，天然產物活性物質中，研究最清楚的是AChE的酯動部位抑制劑毒扁豆堿，以其為模板合成的氨基甲酸酯類農藥，已經成為農藥生產上一種主要殺蟲劑，有機磷、氨基甲酸酯類農藥對乙酰膽堿酯酶(AChE)有強烈的抑制作用，主要是它們能夠與AChE的活性

2、部位快速不可逆地結合，使酶失活，從而引起中毒，起到殺蟲的作用。因此，提取分離純化害蟲體內乙酰膽堿酯酶并用于天然產物農藥體外篩選乃至高通量篩選是研制新一代農藥十分有效的方法。本文主要對粗酶液的提取條件進行了研究，采用了Sephadex G-25層析，DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析和SephacrylS-200凝膠過濾層析，對鱗翅目模式生物昆蟲家蠶的頭部粗酶提取液中的乙酰膽堿酯酶進行純化及純化前后酶學性質研究，

3、實驗結果表明家蠶頭部乙酰膽堿酯酶的粗酶最適提取緩沖液條件為：1％Trition X-100，pH 8.0。在堿性pH條件下發(fā)現了底物(ATChI)的自身水解現象，出現在反應體系pH值大于8.5之后。純化后得到的樣品經聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和SDS-PAGE檢測均為一條帶，用SDS-PAGE法測得其分子量為77.8 kDa。酶的最適反應溫度為37℃，最適pH為7.5，對底物碘化硫代乙酰膽堿(ATChI)的Km值為0.392 mmo