人端粒酶hTRT的基因免疫和輻射敏感性研究.pdf

1、上海醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人端粒酶hTRT的基因免疫和輻射敏感性研究姓名：朱涵能申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：放射醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)方向指導(dǎo)教師：程文英;熊思東2000.4.1端粒酶檢測(cè)方法，對(duì)不同腫瘤組織和細(xì)胞株進(jìn)行測(cè)定，尋求腫瘤早期診斷和術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)中的實(shí)用價(jià)值；( 3 ) 尋找端粒酶抑制劑，以達(dá)到腫瘤治療的目的；( 4 ) 研討端粒酶與細(xì)胞衰老的關(guān)系。根據(jù)端粒酶的研究發(fā)展趨勢(shì)，及其大量丈獻(xiàn)檢索，本課題追蹤國際上最新發(fā)表的人端粒酶基因序列，設(shè)計(jì)擴(kuò)增

2、克隆其特異性功能區(qū)片段，研究逆轉(zhuǎn)錄酶基元在端粒酶活性表達(dá)中的作用；根據(jù)人端粒酶蛋白目前尚未純化的特點(diǎn)，首先試探以基因免疫方法制備端粒酶抑制劑；結(jié)合放射生物學(xué)原理，將端粒酶理論運(yùn)用于電離輻射影響和細(xì)胞輻射敏感性研究。試圖回答以下三個(gè)問題：人端粒酶基因免疫方法可否成為新的腫瘤抑制劑探索途徑? 端粒酶基因是否是細(xì)胞輻射敏感性相關(guān)基因之一? 人端粒酶基因特異性功能區(qū)片段是否與端粒酶活性相一致? 卜9 ?“二——一廠，本課題的研究是通繞著新近發(fā)現(xiàn)

3、葛公與腫瘤密切相關(guān)的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因h T R T 序列為主線展開，借助于超長P C R 技術(shù)，克隆了h T R T 翻譯區(qū)全長片段。直接注射h T R T 質(zhì)粒D N A ，觀察基因免疫小鼠抗體變化，及其抗血清對(duì)載瘤裸鼠的瘤組織生長抑制影響。通過轉(zhuǎn)染技術(shù)建立h T R T 真核表達(dá)重組體，以T R A P 法觀察人端粒酶活性變化，F(xiàn) C M 法觀察其增殖能力變化，用集落形成法研究了人端粒酶活性與細(xì)胞輻射敏感性的相關(guān)性。在上述工作的

4、基礎(chǔ)上，運(yùn)用R T —P C R 技術(shù)擴(kuò)增了h T R T 類似基因h E S T 2 的功能區(qū)片段，與端粒酶活性對(duì)應(yīng)性比較，探究逆轉(zhuǎn)錄酶基元在端粒酶活性表達(dá)中的重要性。進(jìn)一步還研究了電離輻射對(duì)h E S T 2 功能區(qū)片段表達(dá)及端粒酶活性的影響。f 上述實(shí)驗(yàn)研究項(xiàng)目，通過M e d l i n e 查詢，均萊發(fā)現(xiàn)與此項(xiàng)目相似之報(bào)道夏。，／。、 ：第一部分人端粒酶h T R T 克隆及真核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定h T R T 是人端粒酶逆