轉錄因子Blimp1和BCDA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中高表達的意義研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)簡稱紅斑狼瘡，是由多克隆自身反應性物B細胞介導的自身免疫性疾病，其直接的致病因子是多克隆自身抗體，并以免疫復合物的形式造成多種組織器官損傷。對于引起SLE的確切病因仍然不很明確，但是自身抗體對SLE的發(fā)病起到了很重要的作用已是共識。目前臨床上治療SLE最常用的措施是使用非特異性免疫抑制劑、細胞毒藥物和激素，盡管這些藥物能有效地抑制免疫活性細胞，控制疾病病程

2、，但毒副作用比較明顯，另一方面由于用藥后自身反應性淋巴細胞持續(xù)存在，因此很難達到治愈的目的。近年來針對分化為漿細胞產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞治療紅斑狼瘡雖然取得了很大進展，但是此策略因為不能有效清除漿細胞，體內長壽漿細胞依然分泌自身抗體，這些抗體可再次激活病理性免疫應答反應，進而導致SLE患者復發(fā)，所以尋求針對分泌抗體的漿細胞的新靶標成為核心問題。
　　目的：
　　本研究旨在探索重慶地區(qū)活動性系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者，外周血促B淋巴細胞

3、成熟蛋白1(Blimpl/PRDMl)、B淋巴細胞成熟抗原(BCDA)表達和CD138+漿細胞數(shù)量和健康人之間的是否存在差異，揭示PRDM1、BCDA表達與CD138+漿細胞數(shù)量之間的關系。同時通過紅斑狼瘡動物模型和正常動物對比，了解Blimp1在動物不同組織的表達情況，以及揭示Blimp1與紅斑狼瘡之間的關系。本研究的開展將明確Blimp1可否成為以漿細胞為靶細胞治療紅斑狼瘡，為進一步開發(fā)治療紅斑狼瘡的新藥奠定基礎，還可以為治療其他漿

4、細胞相關疾病的藥物設計提供新的策略
　　方法
　　1.收集40例SLE患者血液標本為實驗組，30例健康體檢血液標本為對照組。提取外周血單個核細胞總RNA、逆轉錄得到cDNA，再進行熒光定量PCR(FQ-PCR)，根據(jù)相對定量法計算PRDM1、BCMAmRNA相對表達情況。
　　2.收集40例SLE患者血液標本為實驗組，30例健康體檢血液標本為對照組。Ficoll梯度離心收集外周血單個核細胞，按照CD38-FITC，CD

5、56-PE，CD45-PC5；CD19-FITC，CD138-PE，CD45-PC5；IgG1-PE/IgG1-FITC/IgG1-PC5，CD45-PC5三組標記細胞，流式細胞技術研究CD138+漿細胞量的差異。
　　3.紅斑狼瘡模型小鼠和正常對照小鼠在16周齡時乙醚麻醉處死，取腎臟、脾臟及淋巴結組織，行免疫組化、免疫印跡、HE染色，觀察Blimpl蛋白表達以及病理變化。提取上述組織總RNA，行RT-PCR和電泳，測量Blimp

6、1凝膠光密度OD值，計算模型小鼠和正常小鼠Blimpl mRNA表達相對倍數(shù)。
　　結果
　　1.經(jīng)過SPSS13.0統(tǒng)計軟件t檢驗計算得出SLE實驗組PRDM1和BCMA的△ct值和體檢對照組的△ct值有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果實驗組PRDM1△ct為0.67，BCMA△ct為0.81；對照組PRDM1△ct是1.74，BCMA△ct為1.72。通過相對定量2-△△ct法計算，得到SLE實驗組的PRDM1 mRNA

7、的含量是體檢對照組的2.09倍，SLE實驗組的BCMA mRNA的含量是體檢對照組的1.87倍。
　　2.用流式細胞技術分析，結果提示SLE患者和健康對照者外周血CD138+漿細胞數(shù)量差異明顯。
　　3.經(jīng)Imagepro-Plus6.0軟件檢測免疫組化(IHC)光密度OD值，結果顯示Blimpl蛋白在SLE模型小鼠的腎臟、脾臟及淋巴結組織內表達明顯高于正常小鼠，具有統(tǒng)計學意義(P均小于0.05)。其結果顯示Blimpl蛋白

8、在SLE模型小鼠的腎臟、淋巴結及脾臟組織表達分別是正常小鼠的1.57、1.86、2.00倍。經(jīng)quantity one軟件分析Western Blot，PCR產(chǎn)物電泳凝膠的光密度OD值(P均小于0.05)，Western Blot果結顯示Blimpl蛋白在SLE模型小鼠的腎臟、淋巴結及脾臟組織表達分別是正常小鼠的1.54、1.99、2.21倍；Blimpl mRN，A在SLE模型小鼠的腎臟、淋巴結及脾臟組織表達分別是正常小鼠的1.76、

9、2.02、2.05倍。HE染色結果顯示腎臟間質內有少量炎細胞浸潤，局灶性漿細胞、淋巴細胞及少量巨噬細胞浸潤。偶見腎小球內細胞數(shù)增多，基底膜略增厚。淋巴結淋巴濾泡增生，生發(fā)中心擴大。脾臟脾小體明、暗區(qū)結構正常，偶見紅髓中多核巨細胞增生明顯，小動脈周增生及出現(xiàn)少量漿細胞。
　　結論：
　　1.證實在SLE患者外周血PRDM1和BCMA mRNA高表達，CD138+漿細胞數(shù)量的增多與PRDM和BCMA高表達相關。PRDM1和BCM