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文檔簡介
1、目的:
1.研究開發(fā)快速、靈敏、親環(huán)境的DNA檢測方法,為聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠上DNA的檢測提供合適的方法;
2.探究凝膠上DNA的檢測機理,闡明VPBBO染料與核酸的相互作用,探討了其作用方式和作用機理,將有助于人們從分子水平上了解檢測機制。
方法:
1.DNA染料檢測方法:選用堿性艷藍BO(VPBBO)染料,考察影響檢測結(jié)果的各個因素,如染色液的濃度及組成、染色時間、脫色
2、時間及各種鹽離子對檢測結(jié)果的影響等,建立DNA染料檢測操作步驟;
2.為了能更深入的研究染料檢測的機理,通過采用光譜法、粘度法、分子對接模擬、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同研探究染料與DNA的相互作用。
結(jié)果:
1.分別在瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠上建立了DNA染料檢測方法,靈敏度分別為0.4-0.8 ng/band和0.8-1.6 ng/band,其操作步驟分別如下:
(1)瓊脂糖凝
3、膠a、染色:在25 ml組成為0.005% VPBBO/10%乙醇/0.1% NaHCO3的染色液中染色10 min;
b、脫色:在25 ml組成為40%乙醇/1%乙酸脫色液中脫色3-5 min。
(2)聚丙烯酰胺凝膠a、染色:在50 ml組成為0.001% VPBBO染色液中染色10 min;
b、水洗:在50 ml DW中水洗1 min。
2.通過采用光譜法、粘度法、分子對接模
4、擬法、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同探究染料與DNA的結(jié)合機制,VPBBO染料和DNA以溝槽形式相結(jié)合。
結(jié)論:
1.新建立的DNA染料檢測方法在瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠上的靈敏度分別為0.8-1.6 ng/band和0.4-0.8 ng/band,與EB熒光染色法相似;
2.通過采用光譜法、粘度法、分子對接模擬法、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同研探究染料與DNA的結(jié)合的機制,VPBBO染料和DNA以
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