特發(fā)性中樞性性早熟女童雌激素受體α基因Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多態(tài)性分析及血清骨形成標(biāo)志物的研究.pdf

1、研究目的:
　　通過觀察特發(fā)性中樞性性早熟女童ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性，探討其與中樞性性早熟發(fā)病的關(guān)系;測定ICPP女童血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶及NT-proCNP等骨形成標(biāo)志物的水平，探討ERα基因多態(tài)性對骨形成標(biāo)志物的影響，以期對ICPP女童的診斷和評估提供有用的分子生物學(xué)和生化觀察指標(biāo)。
　　材料與方法:
　　1、研究對象
　　選取2013年1月至2014年08月在深圳市婦幼保健院兒科內(nèi)分泌門診

2、及住院的ICPP女童100例，初診年齡4～10.5歲，平均(6.690±1.580)歲，所有患兒經(jīng)詳細(xì)詢問病史、體格檢查、測定甲狀腺功能、肝腎功能、垂體MRI(平掃+增強(qiáng))、盆腔(子宮、卵巢)、肝臟和腎上腺彩超及骨齡等檢查，經(jīng)過促性腺激素釋放激素(GnRH)激發(fā)試驗(yàn)均符合ICPP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[19]，同時(shí)排除因誤服避孕藥等引起的外周性性早熟，排除顱內(nèi)及盆腔、肝臟、腎上腺等部位的占位病變和其他內(nèi)分泌疾病，如McCune-Albright綜合

3、征等引起的性早熟，同時(shí)隨機(jī)選擇同一時(shí)期在我院體檢的健康女童100例為對照組，均未出現(xiàn)第二性征，生長發(fā)育正常，無慢性消耗性疾病，年齡在3.83～10.00歲，平均(5.81±1.12)歲，年齡的差異在兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.87，P＞0.05)。所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法
　　(1)收集ICPP女童和正常健康對照組兒童肘靜脈血各6ml，其中3ml血用于分離血清后檢測血清骨形成標(biāo)志物水平;另3

4、ml靜脈血以待檢測ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性。
　　(2)采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)方法檢測兩組女童ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ限制性片段長度多態(tài)性，檢測ERα基因PvuⅡ和Xba的基因型分布及P等位基因和X等位基因的基因頻率。
　　(3)采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定ICPP女童及正常對照組女童血清骨形成標(biāo)志物及胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth f

5、actor-1，IGF-1)含量，采用美國Beckman公司生產(chǎn)的Unicel DXI80全自動熒光免疫分析系統(tǒng)測定黃體生成素(LH)、促卵泡素(FSH)，雌二醇(E2)等。
　　(4)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析，用x2檢驗(yàn)檢測病例組與對照組基因型頻率的分布情況，同時(shí)分析基因型之間的交互作用;計(jì)算OR值和95％CI，以表示它們之間關(guān)聯(lián)強(qiáng)度;計(jì)量資料以（(X)±s）表示，呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間比較采用t檢驗(yàn)，呈非正態(tài)分

6、布的用非參數(shù)t檢驗(yàn)，多組間的計(jì)量資料比較采用協(xié)方差分析(ANCOVA)控制協(xié)變量，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊多組間的比較采用單因素分析，非正態(tài)分布或（和）方差不齊者采用Kruskal-Wills H檢驗(yàn)。兩兩比較方差齊采用LSD檢驗(yàn)，不齊者用非參數(shù)檢驗(yàn)的Dunnett T3檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、PvuⅡ多態(tài)性分析PvuⅡ基因型及P等位基因頻率在兩組中分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.02

7、3,P=0.011;x2=6.938，P=0.011)，在ICPP組中，P等位基因頻率為40.5％，正常對照組中則為28.0％，OR值是1.750(95％CI1.152～2.659,P＜0.05);基因型分布上ICPP組和對照組種分別是Pp基因型與PP基因型所占比例較高，各占特定人群的55％和53％。
　　2、XbaⅠ多態(tài)性分析XbaⅠ基因型及X等位基因頻率在兩組中分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.740,P=0.003; x2

8、=11.408,P=0.001);在ICPP組中，X等位基因頻率為42.0％，正常對照組中則為26.5％，OR值是2.061(95％CI1.152～2.659，P＜0.05)，在ICPP組和對照組種分別是Xx基因型與xx基因型所占比例較高，各占特定人群的48％和58％。
　　3、PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性組合分析:9種單體型分布經(jīng)卡方檢驗(yàn)在兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=31.388,P=0.001)，ICPP組PpXX基因型構(gòu)成比(

9、13％)高于對照組構(gòu)成比(3％)，而ppxx基因型構(gòu)成比(11％)低于對照組(39％)。
　　4、ICPP組血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶、NT-proCNP及IGF-1水平高于正常對照組。血清NT-proCNP與IGF-1水平分別在在TannerⅡ期和TannerⅣ期最高（P＜0.05），骨鈣素與骨型堿性磷酸酶水平均以TannerⅢ期最高，但差異缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、ICPP女童的ROC曲線特征顯示，血清骨形成標(biāo)志物含量對

10、中樞性性早熟有一定的診斷價(jià)值，其中血清IGF-1的敏感度及特異度較NT-proCNP、OC與BAP為高。
　　6、在PvuⅡ基因型分布中，Pp基因型血清NT-proCNP水平高于PP基因型(P=0.011)，BAP，OC，IGF-1各基因型中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清NT-proCNP、BAP、OC、及IGF-1水平在XbaⅠ各基因型中差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ位

11、點(diǎn)多態(tài)性與特發(fā)性中樞性性早熟可能有關(guān)，攜帶PvuⅡ的P等位基因發(fā)生ICPP的相對風(fēng)險(xiǎn)是p的1.750倍(95％CI:1.152～2.659，P＜0.05);攜帶XbaⅠ的X等位基因發(fā)生ICPP的相對風(fēng)險(xiǎn)是x的2.061倍(95％CI:1.351～3.145，P＜0.05)，P等位基因和X等位基因可能是ICPP女童遺傳易感性基因，Pp基因型或Xx基因型易于患病，PpXX基因型可能是影響中樞性性早熟的潛在危險(xiǎn)因素。
　　2、ICPP女

12、童血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶、NT-proCNP及IGF-1水平增高，血清NT-proCNP與IGF-1水平分別在在TannerⅡ期和TannerⅣ期最高(P＜0.05)，骨鈣素與骨型堿性磷酸酶水平均以TannerⅢ期最高，但差異缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、血清骨形成標(biāo)志物及IGF-1水平對中樞性性早熟均都有一定的診斷價(jià)值，其敏感度及特異度不一，血清IGF-1較NT-proCNP、OC與BAP其敏感度及特異度較高。
　　4、血