固定化凝乳酶制備酪蛋白糖巨肽的初步研究.pdf

1、酪蛋白糖巨肽（CaseinGlycomacropeptide，CGMP）是一種由凝乳酶（或胃蛋白酶）水解酪蛋白中κ-casein的Phe105-Met106的肽鍵得到的具有64個(gè)氨基酸殘基的短肽。CGMP具有多種生物活性。目前CGMP生產(chǎn)主要是從乳清中提取，由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在，使大規(guī)模生產(chǎn)CGMP存在一定的技術(shù)困難。本文研究以酶解干酪素工藝生產(chǎn)CGMP，并對(duì)酶解工藝中的凝乳酶進(jìn)行固定化研究，降低工業(yè)成本，同時(shí)利用多種方法分

2、離提純CGMP，獲得不同純度的CGMP的制備工藝。
　　凝乳酶的固定化工藝根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用Minitab軟件對(duì)影響固定化凝乳酶的主要因素進(jìn)行了篩選，結(jié)果表明加酶總量、固定化時(shí)間、戊二醛濃度對(duì)凝乳酶固定化有顯著影響。根據(jù)Minitab的分析結(jié)果，采用DesignExpert軟件中響應(yīng)面設(shè)計(jì)及分析對(duì)酶解主因素進(jìn)行了優(yōu)化，經(jīng)軟件分析預(yù)測(cè)優(yōu)化后，并根據(jù)實(shí)際條件最終確定戊二醛濃度為13％，酶總量200mg/(g載體)，交聯(lián)化時(shí)間3h

3、，固定化時(shí)間50min。
　　對(duì)固定化凝乳酶的酶學(xué)性質(zhì)和穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)定，其最適溫度55℃、最適pH為5.5，具有很好的穩(wěn)定性。固定化酶活力回收率達(dá)到26.59％。通過對(duì)固定化酶與游離酶生產(chǎn)CGMP的比較，發(fā)現(xiàn)酶解干酪素的上清液中CGMP的含量沒有明顯差異?？芍貜?fù)使用6次，說明該固定化凝乳酶具有良好的操作穩(wěn)定性。保存2個(gè)月的酶活仍在80％以上，具有很好的工業(yè)化應(yīng)用潛力。
　　在酪蛋白糖巨肽的分離純化部分，考察了膜過濾分離方法

4、與離子交換層析的最佳條件。結(jié)果表明以截留量為5000Da的超濾膜，確定了超濾壓力為0.03Mpa，pH值7。篩選出陰離子交換樹脂D280對(duì)CGMP進(jìn)行分離純化，上樣量1/10BV，pH為6.5，洗脫流速1BV/h，0.4，0.6，1.0mol/L的NaCl沈脫梯度，各梯度洗脫體積為1.5BV，其中CGMP被洗脫濃度為0.6mol/L的NaCl，酪蛋白糖巨肽的回收率可以達(dá)到75.68％。通過不同的分離方法，在確定的最佳條件下，經(jīng)過噴霧干燥