酪蛋白糖巨肽對(duì)腸粘膜獲得性免疫信號(hào)通路的作用研究.pdf

1、本研究在以往學(xué)者研究的基礎(chǔ)上，以購(gòu)得的進(jìn)口純品CGMP為刺激物，研究CGMP對(duì)先天免疫和獲得性免疫的調(diào)節(jié)作用。一方面用Balb/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，將一系列不同濃度的CGMP分別以灌胃和腹腔注射兩種方式給藥，給藥2小時(shí)后分別眼眶取血，分離血清，利用懸浮液體芯片系統(tǒng)，檢測(cè)小鼠外周血血清中24種細(xì)胞因子的濃度，研究CGMP對(duì)小鼠細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的影響作用和對(duì)小鼠可能產(chǎn)生的先天免疫應(yīng)答作用。結(jié)果口服給藥后有顯著變化的細(xì)胞因子有4種，分別為GM-CS

2、F、IFN-γ、IL-2、MIP-1α；腹腔注射后有顯著變化的細(xì)胞因子有7種，分別為Eotaxin、TNF-α、G-CSF、GM-CSF、IL-6、IL-17、KC。另一方面以C57BL/6雄性小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，誘導(dǎo)培養(yǎng)其骨髓源樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)，培養(yǎng)至合適時(shí)間后將一系列不同濃度的CGMP添加到DCs培養(yǎng)體系中，分別以空白完全培養(yǎng)基和LPS做為空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)48h后分離細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞

3、，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DCs的成熟情況；同時(shí)，將添加刺激物并培養(yǎng)48h后的DCs與分離純化后得到的T細(xì)胞以不同比例混合，將兩種細(xì)胞共同孵育96h，用CCK-8試劑盒檢測(cè)DCs對(duì)T細(xì)胞的增殖程度的作用。選擇DCs對(duì)T細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)烈的兩者的比值，同樣用CGMP刺激DCs后進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束分離細(xì)胞培養(yǎng)上清液，檢測(cè)其中的24中細(xì)胞因子濃度。結(jié)果表明：細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞因子有顯著變化的8種分別為G-CSF、GM-CSF、IFN-