納米EGCG制備及其對MCF-7腫瘤細(xì)胞的抑制功效評價(jià).pdf

1、EGCG是綠茶中提取分離的多酚類生物活性物質(zhì)，且對多種癌癥和其它慢性疾病均有化學(xué)預(yù)防作用。EGCG在體內(nèi)對腫瘤組織的定向攻擊弱，生物利用率低，以及低效的給藥系統(tǒng)都影響了EGCG功能的發(fā)揮。將EGCG封裝在納米粒子中可以提高EGCG的生物利用率，體現(xiàn)劑量優(yōu)勢。岡此，利用納米技術(shù)米彌補(bǔ)EGCG存在的問題。
　　 本文以EGCG為藥物模型，就提高其在MCF-7腫瘤細(xì)胞中的靶向性和緩釋效果為目的，進(jìn)行納米EGCG藥物粒子的制備工藝優(yōu)化;

2、從細(xì)胞水平研究納米EGCG粒子對MCF-7腫瘤細(xì)胞生長的影響，在前人研究基礎(chǔ)上，考慮不同納米載體對EGCG藥物的影響和納米EGCG修飾的抑制腫瘤效果，從而擬定出以CS為載體，用FA和PEG修飾制備高靶向性和高緩釋效果的EGCG-(FA+PEG)-CSNPS;并考察比較EGCG、EGCG-CSNPS、EGCG-FA-CSNPS、EGCG-PEG-CSNPS、EGCG-(FA+PEG)-CSNPS對MCF-7腫瘤細(xì)胞的毒性、抑制增殖效果。取

3、得結(jié)果如下:
　　 一、實(shí)驗(yàn)采用陰離子交聯(lián)劑——三聚磷酸鈉（SodiumTripolyphosphate，TPP）作為交聯(lián)材料，將EGCG裝載到殼聚糖(Chitosan，CS)與TPP形成的納米粒子中，制備出EGCG-NPs。實(shí)驗(yàn)考察了CS粘度、CS/TPP以及EGCG濃度變化對納米粒子的形態(tài)和包封率的影響。結(jié)果表明，CS粘度200cps，脫乙酰度95％，CS/TPP4∶1時(shí)，得到了粒徑在150nm～300nm的EGCG殼聚糖納

4、米粒子，EGCG包封率達(dá)到了72.64％。調(diào)節(jié)這些參數(shù)不僅會影響納米粒子的形態(tài)和包封率還會影響到EGCG的釋放率。在72h，納米粒子的釋放率為53.4％，體外釋放試驗(yàn)研究證明了EGCG-NPs在控釋給藥有很大的潛力。
　　 二、用兩種方法對EGCG-NPs進(jìn)行FA和PEG修飾:1）先采用離子交聯(lián)法形成EGCG-NPs，在EDC的作下下枝接FA，然后再連接PEG到納米粒子上，形成得到EGCG-FA-CSNPS、EGCG-PEG-C

5、SNPS、EGCG-(FA+PEG)-CSNPS-1。2)先在CS上枝接配體FA和PEG形成FA-PEG-CS，然后再采用離子交聯(lián)法與TPP交聯(lián)得到EGCG-(FA+PEG)-CSNPS-2。用紫外分光光度計(jì)表征EGCG-(FA+PEG)-CSNPS-1與EGCG-(FA+PEG)-CSNPS-2的FA轉(zhuǎn)化率分別為81.67％和88.97％。用SEM觀察到粒徑小、分布均勻的各不同修飾的EGCG-NPs。FT-IR和1HNMR進(jìn)一步表征證

6、明EGCG-NPs修飾FA和PEG成功。
　　 三、采用倒置顯微鏡觀察不同修飾的EGCG納米粒子對MCF-7細(xì)胞形態(tài)的影響，亞甲基蘭法測定各不同修飾的EGCG納米粒子對MCF-7細(xì)胞毒性、細(xì)胞增殖率的影響。用中效劑量原理分析FA和PEG的共同對EGCG在抑制MCF-7生長上起到的作用。結(jié)果表明，EGCG與各不同修飾的EGCG納米粒子對MCF-7均有抑制作用，在濃度為500μM時(shí)，各納米粒子使得MCF-7細(xì)胞大量死亡，抑制效果EG

7、CG-FA-NPs＞EGCG-PEG-NPs＞EGCG-NPs＞EGCG。雙修飾的納米粒子EGCG-(FA+PEG)-NPs-1和EGCG-(FA+PEG)-NPs-2對MCF-7乳腺癌抑制生長的效果最強(qiáng)，兩者能力相當(dāng)。
　　 以上研究表明，EGCG納米制備工藝得到優(yōu)化的同時(shí)具有一定的緩釋能力。EGCG-NPs成功枝接靶向性配體FA和親水性聚合物PEG。經(jīng)修飾后的納米粒子在抑制MCF-7細(xì)胞增殖能力有所提高。納米粒子中FA的導(dǎo)入