苦參堿對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的:本研究應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法,采用多種檢測(cè)手段,觀察苦參堿對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討,為苦參堿應(yīng)用于乳腺癌的臨床輔助治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:乳腺癌MCF-7細(xì)胞在RPMI-1640培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)和傳代,設(shè)立對(duì)照組和多種藥物濃度實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞加入不同濃度的苦參堿,對(duì)照組細(xì)胞加等量培養(yǎng)液進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。(1)用MT

2、T法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率;(2)在倒置顯微鏡、正置光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡下觀察MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,FCM)分別檢測(cè)MCF-7細(xì)胞凋亡情況、MCF-7細(xì)胞線粒體跨膜電位及MCF-7細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.苦參堿對(duì)MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率測(cè)定
　　 苦參堿作用于乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h、48h和72h的生長(zhǎng)抑制

3、率分別介于6.01％～35.58％,7.97％～51.56％和11.98％～68.31％不同濃度的苦參堿對(duì)MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率與對(duì)照組相比存在顯著差異(P＜0.05),且呈劑量一效應(yīng)正相關(guān)及時(shí)間一效應(yīng)正相關(guān)。
　　 2.MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變
　　 對(duì)照組MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)良好,緊密排列,呈梭形或多突起形態(tài),突起較長(zhǎng),細(xì)胞漿和細(xì)胞核均嗜堿性,可見(jiàn)較多的病理性核分裂象。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞突起短縮、胞漿減少

4、,逐漸變圓,胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不等的空泡,細(xì)胞漿嗜酸性隨苦參堿濃度增高而逐漸增強(qiáng)。染色質(zhì)凝集呈團(tuán)塊狀,出現(xiàn)不同程度的核固縮、碎裂、核分裂相減少及核偏位,呈新月形,形似“印戒細(xì)胞”。少數(shù)細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞膜向外膨出的“出芽”現(xiàn)象,個(gè)別細(xì)胞外形似玫瑰花環(huán)狀。熒光顯微鏡下可見(jiàn)凋亡及壞死細(xì)胞,且隨濃度的增高凋亡和壞死細(xì)胞也逐漸增多。這些形態(tài)學(xué)改變是細(xì)胞凋亡過(guò)程中不同階段的形態(tài)特點(diǎn)。
　　 3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)MCF-7細(xì)胞凋亡
　　 苦參堿

5、對(duì)MCF-7細(xì)胞有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用。藥物作用24h細(xì)胞凋亡發(fā)生率介于4.10％～19.80％之間,與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05)。隨苦參堿濃度的增高,凋亡的發(fā)生率也相應(yīng)增高。
　　 4.線粒體跨膜電位的檢測(cè)
　　 苦參堿處理MCF-7細(xì)胞24h,羅丹明123染色后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果顯示:苦參堿處理組MCF-7細(xì)胞羅丹明染色陽(yáng)性數(shù)(％)明顯低于對(duì)照組,存在顯著差異(P＜0.05),并隨苦參堿作用濃度的增高而減

6、少,呈負(fù)相關(guān)。由此判定苦參堿能夠引起MCF-7線粒體跨膜電位顯著下降,并隨藥物濃度的增加而下降程度加大。
　　 5.MCF-7細(xì)胞Bax,Bcl-2蛋白表達(dá)
　　 苦參堿作用于MCF-7細(xì)胞24h和48h后,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)顯示,Bax蛋白表達(dá)上調(diào),與對(duì)照組相比,存在顯著差異(P＜0.05),且隨作用濃度增高表達(dá)增高,呈正相關(guān)。Bcl-2蛋白表達(dá),除0.25mg/mL苦參堿作用24h組與對(duì)照組

7、比較沒(méi)有差異性外,其余各藥物組與對(duì)照組相比均存在顯著差異(P＜0.05),且隨藥物濃度的增加Bcl-2表達(dá)降低。
　　 結(jié)論:
　　 1.苦參堿對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,呈劑量一效應(yīng)正相關(guān)及時(shí)間一效應(yīng)正相關(guān)?？鄥A能夠誘導(dǎo)乳癌MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡,凋亡率與藥物劑量呈正相關(guān)。
　　 2.苦參堿誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡,其可能的機(jī)制是通過(guò)某種途經(jīng)上調(diào)Bax基因和下調(diào)Bcl-2基因的表達(dá),啟