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文檔簡介
1、乳腺癌是最為常見的女性惡性腫瘤,其發(fā)病率呈上升趨勢。臨床研究發(fā)現(xiàn)20%~30%的乳腺癌病人中存在人表皮生長因子受體-2(human epithelial growth factor receptor-2,HER-2)基因的表達(dá)增強(qiáng),而且與乳腺癌的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移、治療效果和預(yù)后轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。E1A基因是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種具有抑癌作用的基因,在腫瘤的基因調(diào)控和治療方面發(fā)揮重要的作用,在宮頸癌和卵巢癌中能抑制HER-2基因和激活某些抑癌基因如
2、p53基因等的表達(dá),并與一些腫瘤細(xì)胞對放、化療的敏感性有關(guān)。本研究利用脂質(zhì)體介導(dǎo),將E1A基因轉(zhuǎn)染HER-2表達(dá)陽性的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7,并研究E1A對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用及其分子機(jī)制。
方法:
利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)檢測MCF-7細(xì)胞中E1A的表達(dá),RT-PCR和Western雜交檢測E1A基因?qū)ER-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的調(diào)控,MTT法檢測E1A對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用,軟瓊脂集落法檢
3、測E1A對MCF-7細(xì)胞集落形成的影響,并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測E1A對MCF-7細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
結(jié)果
MCF-7細(xì)胞無內(nèi)源性的E1A表達(dá),E1A在MCF-7細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)顯著性地降低了細(xì)胞中HER-2mRNA和蛋白表達(dá)水平,誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。細(xì)胞增殖曲線顯示E1A基因顯著性抑制MCF-7細(xì)胞增殖和細(xì)胞集落形成能力。E1A基因?qū)ER-2的抑制通過上調(diào)caspase-3途徑實(shí)現(xiàn)。
結(jié)論:<
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