家蠅幼蟲凝集素的分離純化及其抑制MCF-7細(xì)胞活性的研究.pdf

1、家蠅幼蟲血淋巴粗提液經(jīng)過親和層析，分離出3種與D-半乳糖特異性結(jié)合的蛋白，經(jīng)高效液相色譜和聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離出分子質(zhì)量為38 ku的家蠅幼蟲凝集素(MLL-2)，該組分具有明顯的凝血活性，并且MLL-2是一種熱敏感型凝集素。圓二CD色譜結(jié)果表明，MLL-2的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要是以β折疊和無規(guī)卷曲的構(gòu)象存在。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MLL-2對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，其抑制效果具有時(shí)間和濃度依賴性。通過HE染色、Hoc

2、hest33258染色和吖啶橙染色從形態(tài)學(xué)上表明，MLL-2處理過的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞出現(xiàn)凋亡小體、染色質(zhì)濃縮等典型的凋亡現(xiàn)象。MLL-2處理過的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)TNUEL檢測(cè)出DNA鏈斷裂，證明發(fā)生凋亡現(xiàn)象。經(jīng)流式細(xì)胞儀分析人乳腺癌MCF-7細(xì)胞被阻遏在G2/M期，并且凋亡細(xì)胞隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。在人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡過程中，作為線粒體途徑信使的Ca2+明顯增加，并且線粒體途徑上游的p53蛋白、中游的Bcl-2/