2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分
   目的:觀察兩種培養(yǎng)基序貫培養(yǎng)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcells,hUCB-MSCs),及其對(duì)hUCB-MSCs基本生物學(xué)特性的影響。
   方法:密度梯度離心法獲取臍血單個(gè)核細(xì)胞,以DMEM/F12和Oricell人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基(Oricellhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellgrow

2、thmedium,OHUCMSCG)序貫培養(yǎng)hUCB-MSCs,免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其標(biāo)志蛋白,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,繪制生長(zhǎng)曲線,茜素紅與油紅染色鑒定其向成骨、成脂細(xì)胞分化潛能。
   結(jié)果:DMEM/F12原代培養(yǎng)hUCB-MSCs,克隆形成率高,繼續(xù)用DMEM/F12傳代培養(yǎng)hUCB-MSCs至第2代,有利于利用差速貼壁方式純化細(xì)胞;第三代以后改用OHUCMSCG序貫培養(yǎng)hUCB-MSCs至第8代,細(xì)胞均呈梭形、成

3、纖維細(xì)胞樣,旋渦輻射狀排列,并表達(dá)CD29、CD44、CD73、CD166和波形蛋白,而不表達(dá)CD34和CD45:第6代hUCB-MSCs生長(zhǎng)、增殖狀態(tài)良好,倍增時(shí)間為68.llh.對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為2-5d;在適宜條件下,培養(yǎng)21d,可被誘導(dǎo)分化為骨結(jié)節(jié)茜素紅染色陽(yáng)性的成骨細(xì)胞和脂滴油紅染色陽(yáng)性的成脂細(xì)胞。
   結(jié)論:DMEM/F12和OHUCMSCG培養(yǎng)基序貫培養(yǎng)可成功培養(yǎng)hUCB-MSCs,并使其保持良好的基本生物學(xué)特性。

4、r>   第二部分
   目的:觀察人參皂苷Rg1(Rg1)對(duì)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordbloodmesenchymalstemcells,hUCB-MSCs)增殖的影響,以鈣敏感受體(calcium-sensingreceptor,CaSR)為靶點(diǎn),探討Rg1可能的作用機(jī)制。
   方法:取P5至P6代hUCB-MSCs隨機(jī)分為8組:空白對(duì)照組、Rg1由低至高5個(gè)劑量組及Rg1+阻斷劑組

5、(CdCl2)和阻斷劑組,MTT法觀察Rg1對(duì)細(xì)胞增殖的影響,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子含量,RT-PCR和Westemblot技術(shù)檢測(cè)hUCB-MSCsCaSR的mRNA及p-P38和p-ERK蛋白的表達(dá);免疫熒光染色檢測(cè)CaSR受體。
   結(jié)果:與對(duì)照組相比,Rgl各劑量組對(duì)hUCB-MSCs的增殖無(wú)明顯影響(P>0.05):0.01mmol/LCdCl2則可明顯抑制hUCB-MSCs增殖(P

6、不能被Rg1所逆轉(zhuǎn)。與空白組比較,Rg1各劑量組培養(yǎng)上清液中的IL-8、IL-6、LIF和TGF-B1含量無(wú)顯著差異(P>0.05),但hUCB-MSCs與0.01mmol/L的CdCl2+Rg13μmol/L共同培養(yǎng)72h,上述細(xì)胞因子含量呈降低趨勢(shì),以IL-6、LIF降低最為顯著,其余幾種細(xì)胞因子含量均低于檢測(cè)下限(P

7、及CdCl20.01mmol/L+Rg11μmol/L對(duì)hUCB-MSCsCaSRmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異(P>O.05)a免疫熒光染色結(jié)果顯示,Rgl對(duì)CaSR表達(dá)的影響與空白對(duì)照組無(wú)顯著差別oWesternblot檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白組比較,Rgl3μmol/L、CdCI20.01mmol/L+Rg11μmol/L合用組均可明顯降低p-ERK蛋白和p-p38蛋白表達(dá)。
   結(jié)論:1.Rgl對(duì)hUCB-MSCs增殖和CaSR表

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