重金屬鉛、銅免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、重金屬是蓄積性污染物，可以在環(huán)境中長(zhǎng)期積累不降解。傳統(tǒng)的儀器型重金屬檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中存在諸多不足，不能滿(mǎn)足當(dāng)前重金屬污染物快速檢測(cè)的需要，而免疫學(xué)檢測(cè)方法具有快速、高效、低成本等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)日益受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注。
　　 以本實(shí)驗(yàn)室成功制備的鉛單克隆抗體為基礎(chǔ)，選取雜交瘤細(xì)胞株7/4所分泌的抗體進(jìn)行研究。在CELLine CL350細(xì)胞器中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞株7/4分泌抗體，細(xì)胞培養(yǎng)上清液效價(jià)達(dá)1:320，親和常數(shù)為3.96x

2、108L/mol，特異性實(shí)驗(yàn)表明7/4與其它金屬離子無(wú)明顯交叉反應(yīng)，具有較高的特異性。通過(guò)對(duì)鹽離子強(qiáng)度等影響因子的研究建立了鉛單克隆抗體ELISA檢測(cè)體系，其檢測(cè)條件為：包被抗原Pb-DTPA工作濃度0.728μg/mL，細(xì)胞培養(yǎng)上清液為80倍稀釋?zhuān)磻?yīng)基質(zhì)HBS中NaCl的離子強(qiáng)度為0mol/L，pH值為5.0。以L(fǎng)ogit（B/B0）為縱坐標(biāo)、Pb2+濃度（μg/mL）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)建立檢測(cè)曲線(xiàn)，在0.1μg/mL-100μg/m

3、L范圍內(nèi)呈顯著線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)方程為Y=-1.1801X-0.1643，相關(guān)系數(shù)R2=0.9926，IC50值為0.726μg/mL，檢測(cè)極限值為0.048μg/mL，批內(nèi)和批間變異系數(shù)分別為1.32％和2.58％。建立了泡桐、水杉中鉛殘留量檢測(cè)曲線(xiàn)，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)南京棲霞鉛鋅礦區(qū)附近泡桐、水杉葉片，鉛平均殘留量分別為581.78mg/kg和308.88mg/kg。
　　 以本實(shí)驗(yàn)室成功制備的銅單克隆抗體為基礎(chǔ)，選取雜交

4、瘤細(xì)胞株DF4無(wú)血清培養(yǎng)所分泌的抗體進(jìn)行研究。通過(guò)對(duì)鹽離子強(qiáng)度、pH值等影響因子的研究建立了銅單克隆抗體ELISA檢測(cè)體系，其檢測(cè)條件為：包被抗原Cu-EDTA-BSA為80000倍稀釋?zhuān)贵wDF4為160倍稀釋?zhuān)磻?yīng)基質(zhì)HBS中NaCl的離子強(qiáng)度為0.15mol/L，pH值為5.0。以L(fǎng)ogit（B/B0）為縱坐標(biāo)、Cu2+濃度（μg/mL）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)建立檢測(cè)曲線(xiàn)，在0.1μg/mL～100μg/mL范圍內(nèi)呈顯著線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)方