重金屬鉛酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的研究.pdf

1、本論文對(duì)重金屬鉛的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。采用雙功能螯合劑ITCBE將重金屬鉛離子與鑰孔嘁血藍(lán)蛋白(KLH)連接制得免疫原免疫兔子，免疫親和柱純化血清得到高效價(jià)和高特異性的重金屬鉛多克隆抗體。采用雙功能螯合劑ITCBE將重金屬鉛離子與牛血清蛋白(BSA)連接制得包被原，建立了一種間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，對(duì)影響實(shí)驗(yàn)的各種因素（包被量、離子強(qiáng)度、pH值等）進(jìn)行了優(yōu)化與研究，包被量0.1μg/well，離子強(qiáng)度為1mmol/L的P

2、BS，pH為7.5時(shí)所獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線靈敏度最高，穩(wěn)定性最好。本實(shí)驗(yàn)所建立方法的靈敏度(IC50)為3.48μg/L，檢測(cè)限(IC15)為0.32μg/L。與其他金屬離子的交叉反應(yīng)率較低。
　　對(duì)自來(lái)水、海河水、中藥白芷、胡蘿卜、蝦蛄中的重金屬殘留進(jìn)行了檢測(cè)。自來(lái)水直接與螯合劑ITCBE螯合后PBS稀釋5倍，海河水過(guò)0.22μm的水膜后再與螯合劑ITCBE螯合，PBS稀釋8倍，中藥白芷、胡蘿卜、蝦蛄則都將其烘干粉碎后采用強(qiáng)酸(濃硝酸

3、10mL，高氯酸2mL)浸泡并用高壓消解罐(160℃-180℃)硝化至溶液澄清，用Tris-HCl調(diào)節(jié)pH至中性，過(guò)0.22μm的水膜，用雙蒸水稀釋60倍，即可用于待測(cè)分析。添加3個(gè)不同濃度的重金屬鉛離子，回收率可達(dá)到78.5-121％。本實(shí)驗(yàn)所建立的方法在自來(lái)水中的檢出限為1.6μg/L，在海河水中的檢出限為2.56μg/L，在其他樣品中的檢測(cè)限為19.2μg/kg。板內(nèi)變異和板間變異均小于16％。以上結(jié)果證明所建立的方法具有很高的準(zhǔn)