復合酶法制備小麥胚芽多肽的生物活性研究.pdf

1、本課題選擇復合蛋白酶水解小麥胚芽后的得到的多肽，測定分子量分布，利用超濾膜和納濾膜對小麥胚芽多肽進行分段和脫鹽，得到不同分子量的麥胚多肽；研究麥胚多肽的生物活性，包括抗氧化活性、抗疲勞作用、降膽固醇活性等，得出具有較好生物活性的麥胚多肽片段。
　?。?）利用凝膠過濾層析SephadexG-15來測定通過木瓜蛋白酶和中性蛋白酶復合水解麥胚蛋白得到的小麥胚芽多肽的分子量分布狀況，結果顯示，小麥胚芽多肽的分子量主要集中在300Da～25

2、00Da之間，占到59％；2500Da以上的的多肽分子大約占28%；1000Da～2500Da之間的多肽片段大概占到15%；600Da～1500Da之間的多肽分子片段大概占26%；300Da～600Da之間的多肽接近19%；300Da以下的多肽分子大約占總量的14%。根據所測的結果，經過不同分子質量的超濾膜以及納濾膜設備（2000Da、1000Da、600Da、300Da）對小麥胚芽多肽進行超濾分段和納濾除鹽，最后得到5種不同分子質量的

3、小麥胚芽多肽，分別是：MPT-1（大于2000Da的多肽）、MPT-2（1000～2000Da之間的多肽）、MPT-3（600～1000Da之間的多肽）、MPT-4（300～600Da之間的多肽）、MPT-5（小于300Da的多肽）。
　?。?）抗氧化活性研究
　　通過對不同分子量和不同濃度的小麥胚芽多肽的體外抗氧化活性實驗研究，結果顯示出不同濃度的小麥胚芽多肽對DPPH·、O2-以及OH·都有一定的清除作用，且隨多肽濃度的

4、增大，對DPPH·、O2-以及OH·清除率也隨之增加。對于不同分子量的小麥胚芽多肽在同一濃度下進行DPPH·清除率和O2-清除率的測定時，隨著分子量的降低，其活性越來越強，MPT-4分子段的清除率最好，分別可以達到92.3%和57.61%。對于相同濃度的麥胚多肽分子量小的的麥胚多肽的對OH·的清除率高，在相同濃度下，MPT-4的清除率最高，可以達到75.24%。
　　建立小白鼠的氧化損傷模型，把170只小白鼠隨機分成17組，即正常

5、對照組、模型對照組、不同分子質量以及不同劑量的小麥胚芽多肽實驗組。除正常對照組外，其余各組進行腹部注射600mg/(kg·d)D-半乳糖建立氧化損傷模型，5種不同分子質量的多肽組灌胃低、中、高劑量的小麥胚芽多肽，實驗周期為30d，最后進行眼球取血，處死小鼠并解剖，測定血清、肝臟中的超氧化物歧化酶(SOD)的活性、谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)酶的活性、丙二醛(MDA)的含量以及總抗氧化能力(T-AOC)，研究不同分子質量小麥胚芽多肽的

6、體內抗氧化活性。結果表明：小麥胚芽多肽能夠使小鼠血清和肝臟中SOD、GSH-Px以及T-AOC的指標升高，降低小鼠血清和肝臟中脂質過氧化物的MDA含量，具有良好的抗氧化活性?？傮w來說，隨著多肽濃度的升高，抗氧化活性也隨之增強，分子質量在1000Da以下的小麥胚芽多肽具有較強的抗氧化活性。
　　（3）抗疲勞作用
　　主要研究麥胚多肽的抗疲勞效果，包括動物耐力實驗：對小鼠灌胃不同濃度的小麥胚芽多肽，進行游泳實驗以及爬桿實驗。耐缺

7、氧實驗：對小鼠灌胃不同濃度的小麥胚芽多肽，進行常壓耐缺氧實驗以及急性腦缺血型實驗。體內抗疲勞作用：主要目的在于研究小麥胚芽多肽對對運動小鼠血液生化的影響，內容包括全血乳酸測定和肝糖原測定實驗。
　　結果表明：不同分子量的麥胚多肽在200-1000mg/（kg bw·d）劑量范圍具有延長小鼠爬桿時間、游泳時間、抑制小鼠運動后全血乳酸含量的活性，并可維持運動后肝糖原含量等作用，并且在這個范圍內，高劑量的作用效果明顯好于低劑量的作用效果

8、。對于不同分子量的麥胚多肽，MPT-3（600～1000Da）、MPT-4（300～600Da）、MPT-5（小于300Da）的作用效果比MPT-1（大于2000Da）、MPT-2（1000～2000Da）多肽組的效果要好。小麥胚芽多肽能夠顯著延長小鼠的常壓抗缺氧時間，在200～1000mg/（kg bw·d）劑量范圍內具有顯著作用，分子量在1000Da以下的多肽的作用效果更加明顯。
　?。?）降膽固醇活性
　　利用模擬膽汁

9、膠束法研究小麥胚芽多肽的降膽固醇活性，制備體外模擬膽汁膠束溶液，模擬人體腸道環(huán)境，分析測定膽固醇在膽汁膠束溶液中的溶解度，驗證小麥胚芽多肽的降膽固醇活性。
　　結果表明：不同濃度的麥胚多肽對體系中的膽固醇都有一定的抑制作用，低分子肽組MPT-3、MPT-4和MPT-5組的膽固醇含量經過模擬膽汁膠束后與MPT-1相比差異性顯著（P＜0.05）。膽固醇的含量與多肽的分子量有一定的關系，隨著分子量的變小，體系中膽固醇的含量降低。麥胚多肽