南極磷蝦蝦油中磷脂酰膽堿的提取、分離與分析.pdf

1、南極磷蝦作為一種新型漁業(yè)資源,因其在南大洋中生物量上的優(yōu)勢而具有極大的開發(fā)潛力。南極磷蝦脂質(zhì)占南極磷蝦干重的12~50％,其中磷脂酰膽堿的含量達20~33%,是磷脂酰膽堿的良好來源之一。磷脂酰膽堿是一種生物活性分子,可以用作天然乳化劑、保濕劑和穩(wěn)定劑,廣泛應(yīng)用于化妝品、藥品制造業(yè)及餐飲業(yè)等領(lǐng)域。因此,磷脂酰膽堿,特別是純度較高的磷脂酰膽堿具有很大的商業(yè)和應(yīng)用價值。
　　本文使用實驗室常用有機溶劑分別對南極磷蝦蝦油中的磷脂酰膽堿進行

2、單一溶劑提取,根據(jù)提取效果和有機溶劑性質(zhì)確定了無水乙醇和丙酮作為提取溶劑。提取所得粗提樣在高效薄層層析硅膠板GF254上有很好的分離效果,說明分離得到的各個部分極性差異較明顯,有易于柱層析后續(xù)分離純化磷脂酰膽堿。因此,設(shè)計兩種方法從南極磷蝦蝦油中提取分離純化磷脂酰膽堿,并進行定性定量分析。
　　第一,以無水乙醇作為提取溶劑得到乙醇粗提樣后,以95%乙醇為洗脫劑通過氧化鋁柱進行柱層析分離得到主要成分為磷脂酰膽堿的純化乙醇樣品。整個提

3、取分離過程只使用乙醇溶劑,可以提高樣品的安全性。
　　通過單因素實驗和正交實驗探索,乙醇提取的優(yōu)化條件為料液比1:7(W/V)、提取時間30min、提取溫度25℃,該條件下提取六次乙醇粗提樣得率為57.33%±2.48%,高效薄層層析分離后磷脂酰膽堿所占比重為24.73%±0.31%。乙醇粗提樣經(jīng)高效薄層掃描法定量可得,每克蝦油中乙醇可溶性磷脂酰膽堿為0.125g±0.003g,該方法重復(fù)性、穩(wěn)定性好,耗時短較經(jīng)濟。氧化鋁柱分離所

4、得純化乙醇樣品經(jīng)高效液相色譜定性檢測磷脂酰膽堿的純度可以達到79.83%±2.44%。
　　第二,以丙酮為提取溶劑提取出丙酮粗提樣,以氯仿-甲醇混合溶劑為洗脫劑經(jīng)硅膠柱層析分離出純化丙酮樣品,對純化丙酮樣品進行進一步的分析鑒定。
　　通過單因素實驗和正交實驗探索表明,丙酮提取的優(yōu)化條件為料液比1:10(W/V),提取時間50min,提取溫度20℃,該條件下提取六次丙酮粗提樣得率為48.17%±2.29%,高效薄層層析分離后磷

5、脂酰膽堿所占比重為22.78%±0.35%。丙酮粗提樣經(jīng)薄層掃描法定量可得每克蝦油中丙酮可溶性磷脂酰膽堿為0.0705 g±0.0016 g。硅膠柱純化丙酮樣品經(jīng)高效液相色譜定性檢測可得磷脂酰膽堿的純度可以達到97.77%±0.66%。
　　實驗對純化后純度達97.77%±0.66%的磷脂酰膽堿進行了紅外光譜分析和脂肪酸分析。從紅外光譜可以看出,該類磷脂酰膽堿與標準品在基本的官能團組成上是一致的,差異性主要表現(xiàn)在脂肪酸組成上;脂肪

6、酸分析可知其純化樣品中含有五種脂肪酸,包括棕櫚酸、油酸、7-十六烯酸、EPA和DHA。其中,油酸、7-十六烯酸、EPA和DHA均為不飽和脂肪酸,含量高達58.75%,而EPA和DHA的含量達到45.86%。因此,南極磷蝦蝦油中的磷脂酰膽堿是一種可以提供優(yōu)質(zhì)脂肪酸的良好來源,具有重要的營養(yǎng)價值。
　　本實驗從一種新原料——南極磷蝦蝦油中通過兩種途徑分別提取、分離了磷脂酰膽堿。這為高純度磷脂酰膽堿的制備、磷脂酰膽堿的營養(yǎng)評價及進一步生