南極磷蝦殼中蝦青素提取純化與納米包載.pdf_第1頁(yè)
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1、蝦青素具有顯著的抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等生物效能。天然蝦青素在結(jié)構(gòu)、生物功能、應(yīng)用效果及生物安全等方面都優(yōu)于化學(xué)合成的蝦青素,因此從甲殼動(dòng)物殼中提取天然蝦青素成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。南極磷蝦作為南大洋中的關(guān)鍵物種,儲(chǔ)量豐富,體內(nèi)富含蝦青素,亟待開發(fā)利用。
  以南極磷蝦殼作試驗(yàn)材料,采用酶解與有機(jī)溶劑萃取相結(jié)合的方法,研究探索蝦青素的提取工藝。選用二氯甲烷萃取南極磷蝦殼中蝦青素,以蝦青素提取率為指標(biāo),響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果表明最優(yōu)萃取條件

2、為二氯甲烷萃取料液比為1:5g/mL,萃取溫度為30℃,萃取時(shí)間為7h,萃取級(jí)數(shù)為2級(jí),蝦青素提取率最高達(dá)到131.56μg/g(濕重)。為進(jìn)一步提高蝦青素得率,在二氯甲烷萃取之前采用木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解,設(shè)計(jì)4因素3水平的響應(yīng)面試驗(yàn)。結(jié)果表明最優(yōu)酶解條件是酶解pH6.0,酶解溫度為54℃,酶解時(shí)間為88min,酶底比為2.00%,蝦青素提取率最高達(dá)到145.04μg/g(濕重),比直接有機(jī)溶劑萃取法提高了10.25%。
  為進(jìn)一

3、步提高游離蝦青素的含量和純度,對(duì)粗提液做進(jìn)一步分離純化。首先利用KOH-C2H5OH對(duì)粗提液進(jìn)行皂化反應(yīng),將蝦青素酯水解成游離蝦青素,再利用AB-8大孔樹脂進(jìn)行層析分離。結(jié)果表明游離蝦青素得率達(dá)到369.97μg/g(濕重),比皂化前平均提高了83.3%。利用高效液相法(HPLC)對(duì)收集到的樣液進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明樣液中游離蝦青素的純度達(dá)到95.4%。
  為克服蝦青素易受到外界光、熱、金屬離子等因素的影響而導(dǎo)致異構(gòu),提高蝦青素的穩(wěn)

4、定性,引入納米包載技術(shù)。采用卵磷脂、殼聚糖作為納米載體的材料,通過(guò)探頭超聲作用,使兩親性的卵磷脂/殼聚糖在水溶液中形成單分散性的納米乳。以納米乳的平均粒徑為響應(yīng)值,運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì),最終得到最優(yōu)制備條件為卵磷脂/殼聚糖比重為20:1(w/w),超聲時(shí)間為16.0min,Tween-80作為乳化劑的系統(tǒng)用量為1.5%(w/v),卵磷脂/殼聚糖納米乳的平均粒徑為121.34nm(n=3)。納米粒度分析儀測(cè)定納米乳的表面zeta電位是

5、+39.6mV,表明制備的納米乳是較為理想的載體。利用透射電子顯微鏡(TEM)進(jìn)行觀察,納米乳的形態(tài)呈球形并且分布均勻。
  將蝦青素包埋到卵磷脂/殼聚糖納米乳中并進(jìn)行體外評(píng)價(jià)。采用納米包載技術(shù)將蝦青素包埋后,蝦青素納米乳的粒徑變大,表面zeta電位大于+30mV,TEM觀察形態(tài)呈球形并且分布均勻。隨著蝦青素投入量的增加,蝦青素納米乳的平均粒徑變大,載藥量增加,而包封率卻降低。體外釋放試驗(yàn)表明,蝦青素納米乳具有pH敏感性,在低pH

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