南極磷蝦殼中蝦青素提取純化與納米包載.pdf

1、蝦青素具有顯著的抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等生物效能。天然蝦青素在結(jié)構(gòu)、生物功能、應(yīng)用效果及生物安全等方面都優(yōu)于化學(xué)合成的蝦青素，因此從甲殼動物殼中提取天然蝦青素成為近年來的研究熱點。南極磷蝦作為南大洋中的關(guān)鍵物種，儲量豐富，體內(nèi)富含蝦青素，亟待開發(fā)利用。
　　以南極磷蝦殼作試驗材料，采用酶解與有機(jī)溶劑萃取相結(jié)合的方法，研究探索蝦青素的提取工藝。選用二氯甲烷萃取南極磷蝦殼中蝦青素，以蝦青素提取率為指標(biāo)，響應(yīng)面試驗結(jié)果表明最優(yōu)萃取條件

2、為二氯甲烷萃取料液比為1:5g/mL，萃取溫度為30℃，萃取時間為7h，萃取級數(shù)為2級，蝦青素提取率最高達(dá)到131.56μg/g（濕重）。為進(jìn)一步提高蝦青素得率，在二氯甲烷萃取之前采用木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，設(shè)計4因素3水平的響應(yīng)面試驗。結(jié)果表明最優(yōu)酶解條件是酶解pH6.0，酶解溫度為54℃，酶解時間為88min，酶底比為2.00％，蝦青素提取率最高達(dá)到145.04μg/g（濕重），比直接有機(jī)溶劑萃取法提高了10.25%。
　　為進(jìn)一

3、步提高游離蝦青素的含量和純度，對粗提液做進(jìn)一步分離純化。首先利用KOH-C2H5OH對粗提液進(jìn)行皂化反應(yīng)，將蝦青素酯水解成游離蝦青素，再利用AB-8大孔樹脂進(jìn)行層析分離。結(jié)果表明游離蝦青素得率達(dá)到369.97μg/g（濕重），比皂化前平均提高了83.3%。利用高效液相法（HPLC）對收集到的樣液進(jìn)行檢測，結(jié)果表明樣液中游離蝦青素的純度達(dá)到95.4%。
　　為克服蝦青素易受到外界光、熱、金屬離子等因素的影響而導(dǎo)致異構(gòu)，提高蝦青素的穩(wěn)

4、定性，引入納米包載技術(shù)。采用卵磷脂、殼聚糖作為納米載體的材料，通過探頭超聲作用，使兩親性的卵磷脂/殼聚糖在水溶液中形成單分散性的納米乳。以納米乳的平均粒徑為響應(yīng)值，運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化試驗設(shè)計，最終得到最優(yōu)制備條件為卵磷脂/殼聚糖比重為20:1（w/w），超聲時間為16.0min，Tween-80作為乳化劑的系統(tǒng)用量為1.5%（w/v），卵磷脂/殼聚糖納米乳的平均粒徑為121.34nm（n=3）。納米粒度分析儀測定納米乳的表面zeta電位是

5、+39.6mV，表明制備的納米乳是較為理想的載體。利用透射電子顯微鏡（TEM）進(jìn)行觀察，納米乳的形態(tài)呈球形并且分布均勻。
　　將蝦青素包埋到卵磷脂/殼聚糖納米乳中并進(jìn)行體外評價。采用納米包載技術(shù)將蝦青素包埋后，蝦青素納米乳的粒徑變大，表面zeta電位大于+30mV，TEM觀察形態(tài)呈球形并且分布均勻。隨著蝦青素投入量的增加，蝦青素納米乳的平均粒徑變大，載藥量增加，而包封率卻降低。體外釋放試驗表明，蝦青素納米乳具有pH敏感性，在低pH