腹瀉主導(dǎo)型腸易激綜合征患者的腸道菌群研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 腹瀉主導(dǎo)型腸易激綜合征患者的腸道菌群研究
　　目的：
　　腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是一種以腹部不適、腹痛、排便習(xí)慣改變及大便性狀改變?yōu)榕R床表現(xiàn)的功能性胃腸病。其病因尚不明確，該病的發(fā)病因素可能與腸道菌群改變相關(guān)。根據(jù)臨床癥狀不同，IBS被分為腹瀉主導(dǎo)型(IBS-D)，便秘主導(dǎo)型(IBS-C)，便秘腹瀉交替型(IBS-M)，其中

2、IBS-D和腸道菌群的關(guān)系據(jù)研究報(bào)道尤為密切。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Miseq高通量測(cè)序聯(lián)合16s rDNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(QPCR)分析IBS-D患者與正常人群糞便中的腸道菌群分布差異，以期發(fā)現(xiàn)對(duì)腸易激綜合征診斷治療有指導(dǎo)意義的特定菌群。探究腸道菌群與IBS-D患者癥狀嚴(yán)重程度及生活質(zhì)量的關(guān)系。
　　方法：
　　在通過(guò)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)以及患者知情同意的情況下入組邵逸夫醫(yī)院就診的患者，選取40例經(jīng)羅馬Ⅲ診

3、斷標(biāo)準(zhǔn)診斷為IBS-D的患者，同時(shí)入組20例健康人組成健康對(duì)照組，IBS-D患者入組時(shí)填寫(xiě)IBS癥狀等級(jí)評(píng)分量表及SF-36生活質(zhì)量量表。提取IBS-D患者及正常人糞便中的16SrDNA，隨機(jī)各取3例樣本進(jìn)行基于Illumina Miseq平臺(tái)的高通量測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果及既往研究選取特定細(xì)菌引物通過(guò)16S rDNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR法進(jìn)一步檢測(cè)及驗(yàn)證，分析IBS-D組與正常組糞便中的菌群分布差異。比較患者癥狀嚴(yán)重程度、生活質(zhì)量與特定腸道

4、菌群含量的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1)高通量測(cè)序結(jié)果顯示，IBS-D患者的平均細(xì)菌密度低于健康對(duì)照組。IBS-D患者與正常人群對(duì)比，腸道中普雷沃氏菌屬所占的百分比明顯高于正常對(duì)照組，分別為69.77％及8.21％(P＜0.05);而擬桿菌屬所占的百分比明顯低于正常對(duì)照組，分別為4.92％及60.62％(P＜0.05)，其余菌屬分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2）16S rDNA熒光定量PCR結(jié)果顯示IBS-D患者中擬桿菌屬、雙歧桿菌

5、屬、乳酸桿菌屬數(shù)量減少及普雷沃氏菌屬和大腸桿菌數(shù)量增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，最顯著的是，普雷沃氏菌屬在中國(guó)IBS-D患者中較正常人群增加超過(guò)100倍(P＜0.05)。3)普雷沃氏菌屬、擬桿菌屬、雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬及大腸桿菌含量與IBS-D患者癥狀嚴(yán)重程度及生活質(zhì)量無(wú)顯著相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　IBS-D患者腸道內(nèi)普雷沃氏菌屬和大腸桿菌數(shù)量顯著增加，擬桿菌屬、雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬數(shù)量顯著減少。首次發(fā)現(xiàn)了中國(guó)IB

6、S-D患者糞便中的優(yōu)勢(shì)菌屬為普雷沃氏菌屬，其在IBS的發(fā)病機(jī)制和診治中可能發(fā)揮重要作用。
　　第二部分 感染后腸易激綜合征小鼠模型建立及菌群分析
　　目的：
　　部分IBS患者癥狀出現(xiàn)于急性腸道感染之后，因此提出感染后腸易激綜合征(post-infectious irritable bowel syndrome，PI-IBS)的概念，本實(shí)驗(yàn)使用旋毛蟲(chóng)腸道急性感染后小鼠腸易激綜合征模型，通過(guò)QPCR的方法對(duì)其腸道菌群進(jìn)行

7、分析，進(jìn)一步驗(yàn)證腸道菌群在IBS致病中的作用。
　　方法：
　　構(gòu)建PI-IBS小鼠模型，評(píng)估其內(nèi)臟高敏感性及腸道炎癥狀況，通過(guò)QPCR法對(duì)腸道內(nèi)特定細(xì)菌含量進(jìn)行檢測(cè)，分析其與健康對(duì)照小鼠分布差異。
　　結(jié)果：
　　PI-IBS小鼠內(nèi)臟敏感性較正常小鼠增高(P＜0.05)，QPCR結(jié)果顯示PI-IBS小鼠腸道內(nèi)普雷沃氏菌屬增加(P＜0.05)，而雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬、擬桿菌屬、大腸桿菌數(shù)量與正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差