吐納麝香的體內(nèi)代謝及肝臟毒性研究.pdf

1、吐納麝香(AHTN)是最常用的人工合成麝香,其具有較強(qiáng)的親脂性,難降解且易生物富集。目前在各種環(huán)境介質(zhì),生物體甚至人體中均檢測(cè)到它的存在,其潛在毒性已受到廣泛關(guān)注,但有關(guān)AHTN進(jìn)入生物體后的分布情況及其代謝物的研究依然很少。
　　 本研究以HTN為研究對(duì)象,研究?jī)?nèi)容主要有:建立多種生物樣本中目標(biāo)污染物的測(cè)定方法:AHTN在生物體內(nèi)的組織分布、代謝動(dòng)力學(xué)及其代謝物鑒定;AHTN肝臟毒理學(xué)研究。主要結(jié)果如下:
　　 1.建

2、立了多種生物組織樣品(心、肺、腎臟、肝臟、脾臟、肌肉、脂肪、腦、糞便、尿液)中AHTN含量的測(cè)定方法:以乙腈為提取溶劑,通過(guò)超聲提取,HLB小柱凈化,最后用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)檢測(cè)。該方法快速簡(jiǎn)便,線(xiàn)性范圍為0.1-1000μg/L,回收率為90％-128%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%,方法定量限為4μg/kg;
　　 2.通過(guò)單次灌胃的方式暴露大鼠,給藥劑量分別為15mg/kg和100mg/kgAHTN,

3、利用已建立的方法檢測(cè)目標(biāo)化合物在大鼠體內(nèi)的組織分布及排泄情況。結(jié)果顯示,吐納麝香在脂肪組織中含量最高,其次為肝臟、腎臟,在脂肪中半衰期較長(zhǎng),表現(xiàn)為脂肪蓄積性;在血液中濃度約4h達(dá)峰值,且與劑量相關(guān)。通過(guò)超高效液相色譜-四級(jí)桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q/TOF-MS/MS)檢測(cè)了AHTN可能的代謝產(chǎn)物,并根據(jù)MS/MS準(zhǔn)確質(zhì)量信息對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。結(jié)果顯示AHTN在大鼠體內(nèi)的代謝途徑主要為側(cè)鏈羥基化和羧基化,六種代謝物的結(jié)構(gòu)分別是

4、14-OH-AHTN,18-OH-AHTN,8-OH-AHTN,14一OH-8-carbonly-AHTN,14-COOH-AHTN和16-COOH-AHTN。此外,AHTN及其代謝物主要經(jīng)糞便排泄,24h內(nèi)排泄量最高。
　　 3.對(duì)雄性大鼠進(jìn)行AHTN亞急性灌胃(0、15、25、50、100mg,AHTN/kg/day,15天)實(shí)驗(yàn),50和100mgAHTN/kg/day劑量組肝重明顯增加,超微結(jié)構(gòu)變化同樣提示了顯著的肝毒性。

5、利用定量PCR技術(shù)檢測(cè)了代謝相關(guān)基因CYP2B和CYP1A、脂質(zhì)生成相關(guān)基因CYP7A1、SREBP-1c和HMGCR以及雌激素調(diào)控基因ER-α和ER-β的表達(dá)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)AHTN可通過(guò)誘導(dǎo)CYP2B基因表達(dá)，抑制CYP1A表達(dá)來(lái)影響其體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化及毒性；AHTN還可誘導(dǎo)與脂質(zhì)生成相關(guān)的CYP7A1、SREBP-1c、HMGR基因表達(dá)，從而對(duì)肝臟產(chǎn)生毒性作用；與雌激素相關(guān)基因ER-α在AHTN影響下上調(diào)，但ER-β的轉(zhuǎn)錄活性無(wú)顯著變化