高產(chǎn)多糖大球蓋菇菌株原生質(zhì)體誘變選育及其抗氧化能力研究.pdf

1、大球蓋菇(Stropharia rugoso-annulata)，屬擔(dān)子菌門(Basidiomycota)，層菌綱(Hymenomtcetes)，傘菌目(Agaricales)，球蓋菇科(Strophariaceae)，球蓋菇屬(Stropharia)。富含蛋白質(zhì)、多糖、礦質(zhì)元素、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，其多糖具有預(yù)防冠心病、助消化、緩解精神疲勞等功效，對小白鼠S-180腫瘤及艾氏腹水癌抑制率達70％。 紫外線原生質(zhì)體誘變技術(shù)是一種行

2、之有效的育種方法，至今仍廣泛應(yīng)用。真菌多糖在國際上被稱為“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物”，由于其獨特的生理活性，目前正成為國內(nèi)外眾多學(xué)科領(lǐng)域研究的熱點之一。 本課題研究了大球蓋菇菌絲體原生質(zhì)體的制備和再生條件，通過紫外線誘變原生質(zhì)體技術(shù)選育出高產(chǎn)多糖的大球蓋菇菌株．并初步研究了透變菌株和出發(fā)菌株的抗氧化能力，得到以下結(jié)論： 大球蓋菇菌絲體原生質(zhì)體制備的適宜條件為：在30℃、pH 5.5、1.5％溶壁酶條件下，以0.6 mol/L甘露醇

3、作穩(wěn)滲劑，酶解培養(yǎng)3 d的菌絲體2.5h，原生質(zhì)體產(chǎn)量達到1.36× 10<'7>個/mL。適宜再生培養(yǎng)基組成為：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，蛋白胨2 g，酵母粉2 g，KH<,2>PO<,4> 1.5 g，K<,2>HPO<.4> 1.5 g，ragsO<,4>.7H<,2>O 1.5 g，維生素B<,1> 0.1 g，維生素Be 0.1 g，蒸餾水1000 mL，瓊脂20 g。適宜再生的穩(wěn)滲劑為0.6 mol/L甘露醇。上述條件

4、下，雙層平板法進行再生試驗，再生率達0.96％。 在15W紫外燈、照射距離為30 cm條件下，確定了大球蓋菇原生質(zhì)體紫外線輻射至半致死率的照射時間為20s。以出發(fā)菌株為對照，根據(jù)拮抗反應(yīng)和生長狀況篩選出100株大球蓋菇原生質(zhì)體紫外線誘變菌株。以原始出發(fā)菌株為對照，從中篩選出10株大球蓋菇多糖含量高于原始出發(fā)菌株的誘變菌株，將10株誘變菌株及原始出發(fā)菌株分別連續(xù)傳代8次，從中篩選出1株多糖含量高且穩(wěn)定性好的誘變菌株，編號為093，

5、其多糖含量比出發(fā)菌株提高了25.3％。 以灌胃蒸餾水為對照，初步研究了大球蓋菇誘變菌株和出發(fā)菌株對小鼠全血谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidsade，GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量的影響。結(jié)果表明，小鼠全血．GSH-Px活性和SOD活性有所增加，分別在第15 d和第9 d達最高，誘變菌株菌粉制