酶解羅非魚下腳料蛋白制備抗氧化肽的研究.pdf

1、食品氧化變質、機體本身代謝過程中產(chǎn)生的自由基都會對細胞與組織造成嚴重損害，某些蛋白質通過酶解獲得的水解液能夠有效清除自由基防治疾病的發(fā)生。研究表明，羅非魚加工過程產(chǎn)生的大量下腳料中存在一定的蛋白質，目前對這些蛋白質的利用尚處于初級階段，如果能以其為原料，經(jīng)酶水解研制出具有抗氧化活性的多肽，不僅可以充分利用資源，而且所得產(chǎn)物在食品、日化和保健中也有較高使用價值。本文以抗氧化肽體外抑制活性為評價指標，采用酶解技術從羅非魚下腳料蛋白中制備出抗

2、氧化肽，并利用膜技術對其進行初步分離富集，主要工作如下：
　　 采用胰蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶及中性蛋白酶水解羅非魚下腳料蛋白，以酶解液清除超氧陰離子(O2-·)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)和油脂過氧自由基的能力為考察指標，探討不同蛋白酶和不同酶解時間的水解產(chǎn)物的抗氧化性能。結果表明，在水解度達到24.12％時堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物對3種自由基的抑制能力總體最好；在此基礎上根據(jù)單因素和響應面實驗優(yōu)化酶解工藝，得出其最佳

3、水解反應條件為：加酶量(e0/S0)2000U·g-1;底物濃度30.1g·L-1；溫度50.7℃；pH9.48;水解時間4h，此時水解度為24.28％，在該條件下制的的多肽對O2-·、DPPH·及油脂過氧自由基的抑制率分別為35.96％、75.34％和67.58％。
　　 根據(jù)酶解機理，得出了堿性蛋白酶酶解羅非魚下腳料蛋白的酶解速率和水解度動力學模型分別為：R=(159.04e0+0.0894S0)exp-0.14(DH)]，

4、DH=7.13271n[1+(22.2974e0/S0+0.0125)t]，并計算出酶失活常數(shù)kd=22.996min-1，水解活化能△EA=78.77kJ·mol-1，酶失活活化能△ED=102.53kJ·mol-1。模型驗證結果表明，實際值和理論計算值能基本相近。
　　 采用超濾技術對水解液中的活性組分進行分離富集，分別利用10kDa與5kDa的膜將其分成3個組分，以膜通量為評價指標確定了兩種不同規(guī)格膜的最適分離工藝參數(shù)，其

5、中10kDa膜過濾的操作條件為：溫度35℃，pH值7.0，壓力10Psi，初始料液濃度20mg·mL-1;5kDa膜過濾操作條件為：溫度35℃，pH值7.0，壓力12Psi，初始料液濃度25mg·mL-1。比較超濾后不同分子量范圍的3組分抗氧化清除率，結果顯示小于5kDa的多肽組分抗氧化清除效果較好，其對O2-·、DPPH·及油脂過氧自由基的抑制率依次為45.98％、83.29％和79.89％，相比超濾前酶解液清除率有明顯提高，說明超濾

6、能富集擁有較高抗氧化能力的組分；同時比較了超濾前酶解液及超濾后3組分中分子量分布變化情況，結果顯示經(jīng)截留分子量為5kDa的膜超濾得到的滲透液中大于10kDa的物質基本上被截留，滲透液中小于5kDa的物質含量升高，占88.43％。
　　 將堿性蛋白酶酶解羅非魚下腳料蛋白制備抗氧化肽的實驗在同等條件下放大5倍，結果顯示放大實驗的水解度、酶解液蛋白回收率、超濾后小于5kDa的滲透液蛋白回收率分別為26.34％、87.04％和54.21