雞蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究.pdf

1、雞蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究徐明生摘要雞蛋是人類攝取營養(yǎng)物質的一種重要來源，幾乎包含了胚胎發(fā)育所需的所有蛋白質、脂質、維生素、礦物質和生長因子。雞蛋中的蛋白質主要存在于蛋清和蛋黃中，其中蛋清蛋白的種類和含量最為豐富。卵白蛋白是蛋清中的主要蛋白質，占蛋清蛋白質的54％，是獲得生物活性肽的很好資源。本文以雞蛋卵白蛋白為對象，采用生物酶解、抗氧化試驗、離子色譜、反相高效液相色譜、電噴霧質譜等方法，系統(tǒng)研究了酶水解各主要參數(shù)，酶解物抗氧化活性

2、，抗氧化肽的分離純化和結構表征，為開發(fā)雞蛋抗氧化肽產品提供理論基礎。主要結果如下： 1.獲得了簡便、快速、高純度的雞蛋卵白蛋白提取工藝路線。采用Q-SepharoseFF陰離子色譜法對雞蛋卵白蛋白進行分離。通過對蛋清上樣量、緩沖液pH值、緩沖液濃度和洗脫液離子強度等優(yōu)化試驗，獲得的工藝條件為：雞蛋蛋清用2倍的水稀釋，將其pH調至6.0沉淀去除卵粘蛋白，40mLQ-SepharoseFF陰離子柱分離，蛋清上樣量140mL，用0.1

3、5mol/LpH8.0的NaCl水溶液洗脫，可獲得1058mg卵白蛋白，卵白蛋白的得率為55％，經反相高效液相色譜檢測純度為92％。 2.以羥自由基清除率為指標，研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶水解雞蛋卵白蛋白所得酶解物的抗氧化活性。研究表明胃蛋白酶的酶解物羥自由基清除率最高。 3.確定了酶解物羥自由基清除率≥40％的酶解條件。采用響應曲面分析法對底物濃度[S]、胃蛋白酶添加量[E]、酶解時間進行分析，建立了回歸模

4、型，確定了酶解條件，即底物濃度2.22％-3.76％、酶添加量8738.24u/g-11176.63u/g、水解時間4.05-7.77h。 4.首次采用多種抗氧化活性試驗，全面研究了雞蛋卵白蛋白酶解物的抗氧化活性。體外試驗結果表明：酶解物對堿性鄰苯三酚自氧化產生的超氧陰離子、Fenton反應產生的羥基自由基、亞油酸氧化體系中亞油酸的氧化均有明顯的抑制作用，且呈現(xiàn)-定的量效關系。5mg/mL的雞蛋卵白蛋白酶解物，對超氧陰離子的抑制

5、率為45％，對羥基自由基清除率為56％，對亞油酸氧化的抑制能力相當于0.2mg/mLVE的抑制能力，均顯著高于同濃度的卵白蛋白的抑制能力(p＜0.05)。D-半乳糖復制衰老小鼠模型的體內抗氧化試驗的研究結果表明：高、中劑量的雞蛋卵白蛋白酶解物能極顯著抑制衰老小鼠血清和肝臟中SOD、GSH-Px、CAT和T-AOC活性的下降(p＜0.01)；同時能極顯著降低衰老小鼠血清和肝臟MDA的水平(p＜0.01)。 5.探討了不同分子量的雞

6、蛋卵白蛋白酶解物的抗氧化活性。酶解物用三種不同的超濾膜(M]CO10，5and3kDa)分成四個組分。各個組分顯示出不同的抗氧化活性，其中分子量小于3kDa的組分最強。 6.用離子交換色譜和反相高效液相色譜分離獲得了三種雞蛋卵白蛋白抗氧化肽。采用Q-SepharoseFF離子交換層析法對低分子量酶解物進行分離，分級等度洗脫，共獲得5個組分(OPQ1，OPQ2，OPQ3，OPQ4和OPQ5)。再將抗氧化能力最強的OPQ3組份用反相

7、高效液相色譜分離純化，獲得了四個肽，其中OPQ3-1、OPQ3-2和OPQ34具有較強的抗氧化能力，對羥自由基的清除率分別達到78.6％、81.8％和82.3％。 7.采用ESI-MS/MS，對反相高效液相色譜分離純化獲得的3個抗氧化能力較強的雞蛋卵白蛋白抗氧化肽的氨基酸序列進行了測定。OPQ3-1的分子量為408.14Da，由3個氨基酸殘基按序列Pro-Glu-Tyr組成；OPQ3-2的分子量為473.19Da,由4個氨基酸殘