四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的遺傳多樣性與系統(tǒng)發(fā)育研究.pdf

1、泡菜是一種乳酸發(fā)酵制品，含有大量的乳酸菌，而乳酸菌是參與人體腸道微生態(tài)平衡的主要菌系，它對(duì)人體具有各種保健功能。我國(guó)泡菜產(chǎn)地主要在四川地區(qū)，其獨(dú)特的地理環(huán)境和氣候條件有利于乳酸菌的發(fā)酵，這為四川泡菜的生產(chǎn)提供了豐富的物質(zhì)條件。本研究利用16SrDNAPCR-RFLP、ERIC-PCR、AFLP與16SrDNA序列分析等方法，研究了61株分離自四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中乳酸菌的遺傳多樣性及系統(tǒng)發(fā)育。本研究取得如下成果：
　　 供試菌株

2、的16SrDNA用HaeⅢ、MspⅠ、HinfⅠ、HhaⅠ、和TaqⅠ5種酶切后具有17種遺傳類型，其中有39株菌株屬于A型，占所有菌株的59％。在所用的5種限制性內(nèi)切酶中，HhaⅠ切割的帶譜最豐富，是反映乳酸菌16SrDNA序列差異性的最有效的限制性內(nèi)切酶。根據(jù)各菌株相似性進(jìn)行的聚類分析結(jié)果表明，供試菌株的16SrDNAPCR-RFLP相似性比較高，說(shuō)明16SrDNA在進(jìn)化過(guò)程中受環(huán)境的影響較小。ERIC-PCR和AFLP分析靈敏度高

3、，遺傳帶型豐富。ERIC-PCR指紋圖譜分析將供試菌株在45％的相似性水平上聚在了一起，在80％的相似性水平上分為10個(gè)群。AFLP指紋圖譜分析將所測(cè)菌株在58％的相似性水平上聚在了一起，在80％的相似性水平上可分為8個(gè)群。結(jié)果表明四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中的乳酸菌有豐富的遺傳多樣性。從總體分型情況來(lái)看，16SrDNAPCR-RFLP、ERIC-PCR、AFLP的聚類結(jié)果具有較好的一致性。三種分子標(biāo)記一致顯示：一些來(lái)源地不同的菌株相似性較高

4、，而一些來(lái)源相同的菌株相似性卻較低，這表明了四川地區(qū)的自然發(fā)酵泡菜中的乳酸菌沒(méi)有明顯的地域相關(guān)性。大多數(shù)菌株相似性很高甚至達(dá)到了100％，表明了四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中存在明顯的優(yōu)勢(shì)菌。
　　 16SrDNA基因序列的相似性分析表明，代表菌株6-1-2、12-1-1、13-1-3、7-1-2與它們親緣關(guān)系最近的參比菌株的同源性都達(dá)到99％以上，6-1-2被認(rèn)定是植物乳桿菌(L.plantarum)，12-1-1被認(rèn)定是發(fā)酵乳桿菌（

5、L.fermentum），13-1-3和7-1-2被認(rèn)定是耐久腸球菌（E.durans）。5-2-1與親緣關(guān)系最近的干酪乳桿菌(L.casei)的同源性較低，僅94.7％，可能是四川泡菜中未鑒定的乳酸桿菌屬（Lactobacillus）的新種。代表菌株之間的同源性在84％-100％之間，說(shuō)明四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中的乳酸菌具有豐富的遺傳多樣性。
　　 本研究表明，四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中的乳酸菌主要分布在乳桿菌屬（Lactobaci

6、llus）和乳球菌屬（Enterococcus）兩個(gè)屬中，主要包括植物乳桿菌（L.plantarum），發(fā)酵乳桿菌（Lfermentum），耐久腸球菌（E.durans）。乳桿菌屬（Lactobacillus）的菌群是泡菜中的優(yōu)勢(shì)乳酸菌菌群，在乳桿菌屬（Lactobacillus）中植物乳桿菌(L.plantarum)優(yōu)勢(shì)明顯，表明L.Plantarum在四川地區(qū)自然發(fā)酵泡菜中廣泛存在，是泡菜中的優(yōu)勢(shì)菌。
　　 本項(xiàng)研究結(jié)果揭示