基于宏基因組學技術的傳統發(fā)酵泡菜中乳酸菌多樣性研究.pdf

1、泡菜類食品是一種獨特而具有悠久歷史的發(fā)酵制品。在廣西泡菜制品多采用芥菜、豆角、竹筍、姜、辣椒、蘿卜等蔬菜和草魚、鴨肉、豬肉等肉類進行腌制而成。泡菜在發(fā)酵過程中，通過乳酸菌作用生成各種生理活性物質，從而成為具有綜合功能的食品。然而目前對自然發(fā)酵泡菜制品中乳酸菌的組成、生物多樣性、開發(fā)利用的可能性等方面的認識并不十分全面和系統。本研究運用宏基因組學原理借助16S rDNA、PCR-DGGE技術研究傳統發(fā)酵泡菜食品中乳酸菌的生物多樣性，同時，

2、采用傳統純培養(yǎng)技術對相同的發(fā)酵泡菜制品中乳酸菌進行篩選、分離。系統的反映廣西傳統發(fā)酵泡菜食品中的有益菌并確立優(yōu)勢菌株，為揭示廣西傳統發(fā)酵食品的真實面目提供理論基礎和技術支持，也為我國今后的傳統發(fā)酵食品加工業(yè)提供的微生物資源。
　　 利用培養(yǎng)法對從廣西發(fā)酵泡菜（酸芥菜、酸藠頭、酸魚、酸肉等）樣品中分離出的乳酸菌進行了純化。經表型特征和系統的生理生化實驗鑒定，確定為乳桿菌屬、鏈球菌屬、四聯球菌屬3個屬，植物乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳

3、桿菌、乳酸鏈球菌、鹽水四聯球菌5個種。
　　 在抽提發(fā)酵泡菜中細菌基因組總DNA時采用了三種不同的方法：Beadbeater機械法、SDS反復凍融法和溶菌酶消化裂解法進行比較分析。從瓊脂糖凝膠電泳的驗證結果中可以看出溶菌酶消化裂解法效果比較好，而且其操作更快速、簡便。將所得DNA樣品作模板，用細菌通用引物進行PCR擴增檢測，瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示片段長度與乳酸菌16SrDNA的V3區(qū)長度相符，且清晰可辨。
　　 將DGG

4、E獲得的10條帶譜進行克隆測序得到7條不同的序列。測定的序列與乳酸菌16SrDNA部分序列相似性大多在99％以上。其中條帶A與保加利亞乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)有較近的親緣關系，相似性達到100％;條帶B與乳酸鏈球菌（Lactobacil lus sp.）有較近的親緣關系，相似性達到96％;條帶D與漫游球菌菌(Planococcaceae bacterium)有較近的親緣關系，相似性達到10