基于宏基因組學(xué)技術(shù)的傳統(tǒng)發(fā)酵泡菜中乳酸菌多樣性研究.pdf

1、泡菜類食品是一種獨(dú)特而具有悠久歷史的發(fā)酵制品。在廣西泡菜制品多采用芥菜、豆角、竹筍、姜、辣椒、蘿卜等蔬菜和草魚、鴨肉、豬肉等肉類進(jìn)行腌制而成。泡菜在發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)乳酸菌作用生成各種生理活性物質(zhì)，從而成為具有綜合功能的食品。然而目前對(duì)自然發(fā)酵泡菜制品中乳酸菌的組成、生物多樣性、開發(fā)利用的可能性等方面的認(rèn)識(shí)并不十分全面和系統(tǒng)。本研究運(yùn)用宏基因組學(xué)原理借助16S rDNA、PCR-DGGE技術(shù)研究傳統(tǒng)發(fā)酵泡菜食品中乳酸菌的生物多樣性，同時(shí)，

2、采用傳統(tǒng)純培養(yǎng)技術(shù)對(duì)相同的發(fā)酵泡菜制品中乳酸菌進(jìn)行篩選、分離。系統(tǒng)的反映廣西傳統(tǒng)發(fā)酵泡菜食品中的有益菌并確立優(yōu)勢(shì)菌株，為揭示廣西傳統(tǒng)發(fā)酵食品的真實(shí)面目提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持，也為我國(guó)今后的傳統(tǒng)發(fā)酵食品加工業(yè)提供的微生物資源。
　　 利用培養(yǎng)法對(duì)從廣西發(fā)酵泡菜（酸芥菜、酸藠頭、酸魚、酸肉等）樣品中分離出的乳酸菌進(jìn)行了純化。經(jīng)表型特征和系統(tǒng)的生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定，確定為乳桿菌屬、鏈球菌屬、四聯(lián)球菌屬3個(gè)屬，植物乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳

3、桿菌、乳酸鏈球菌、鹽水四聯(lián)球菌5個(gè)種。
　　 在抽提發(fā)酵泡菜中細(xì)菌基因組總DNA時(shí)采用了三種不同的方法：Beadbeater機(jī)械法、SDS反復(fù)凍融法和溶菌酶消化裂解法進(jìn)行比較分析。從瓊脂糖凝膠電泳的驗(yàn)證結(jié)果中可以看出溶菌酶消化裂解法效果比較好，而且其操作更快速、簡(jiǎn)便。將所得DNA樣品作模板，用細(xì)菌通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示片段長(zhǎng)度與乳酸菌16SrDNA的V3區(qū)長(zhǎng)度相符，且清晰可辨。
　　 將DGG

4、E獲得的10條帶譜進(jìn)行克隆測(cè)序得到7條不同的序列。測(cè)定的序列與乳酸菌16SrDNA部分序列相似性大多在99％以上。其中條帶A與保加利亞乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii subsp)有較近的親緣關(guān)系，相似性達(dá)到100％;條帶B與乳酸鏈球菌（Lactobacil lus sp.）有較近的親緣關(guān)系，相似性達(dá)到96％;條帶D與漫游球菌菌(Planococcaceae bacterium)有較近的親緣關(guān)系，相似性達(dá)到10