S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株篩選及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)是一種重要的生理活性物質(zhì),參與生物體內(nèi)40多種生化反應(yīng)。在病理狀態(tài)下,必須以活化了的S-腺苷甲硫氨酸取代L-甲硫氨酸(L-Met)作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)支持正常代謝。本課題以高效液相色譜法作對(duì)照,建立了測(cè)定S-腺苷甲硫氨酸的紫外可見(jiàn)分光光度法,從45株酵母中篩選S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株并對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 (1)發(fā)酵液中S-腺苷甲硫氨酸含量的紫外

2、可見(jiàn)分光光度法的建立。以高效液相色譜法(HPLC)為參照,研究了去核酸處理對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響,建立了發(fā)酵液中S-腺苷甲硫氨酸紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)方法。采用兩種檢測(cè)方法檢測(cè)得S-腺苷甲硫氨酸結(jié)果有高度相關(guān)性,回歸多項(xiàng)式方程為:y=-0.2676x4+1.3309x3-2.377x2+2.4362x+0.2094,R2=0.9125。在0.006g/L-0.30g/L濃度范圍內(nèi),采用紫外分光光度法檢測(cè)的吸光值與S-腺苷甲硫氨酸含量有很好的線性

3、關(guān)系,工作曲線為:y2=36.886x+0.0106,R2=0.9996,其回收率為92％-98％,相對(duì)誤差1.10％、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.33％,紫外檢測(cè)法在30min內(nèi)穩(wěn)定性好、精確度、準(zhǔn)確度、靈敏度較高,可用于S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株的大批量篩選。
　　 (2)以11個(gè)屬的45株酵母菌作為出發(fā)菌株,對(duì)S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株進(jìn)行篩選。不同種屬酵母發(fā)酵產(chǎn)S-腺苷甲硫氨酸的量存在明顯差異,45株酵母菌產(chǎn)S-腺苷甲硫氨酸的量分布在0

4、.01g/L-2.05g/L范圍內(nèi),其中Saccharomyces屬產(chǎn)S-腺苷甲硫氨酸的量顯著高于其他屬,篩選得到的兩株S-腺苷甲硫氨酸高產(chǎn)菌株均為Saccharomyces屬(A12A、A18A)酵母,其產(chǎn)量分別為1.90g/L和2.05g/L。
　　 (3)以篩選出的2株高產(chǎn)S-腺苷甲硫氨酸的釀酒酵母(A12A、A18A)為對(duì)象,研究了發(fā)酵條件對(duì)菌體干重和S-腺苷甲硫氨酸產(chǎn)量的影響,并優(yōu)化了發(fā)酵工藝條件。發(fā)酵溫度、發(fā)酵液初始