唐菖蒲彎孢霉漆酶產(chǎn)生、純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、漆酶(EC1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶，廣泛分布于植物，真菌和細(xì)菌中。漆酶能催化降解許多有機(jī)和無(wú)機(jī)底物，在工業(yè)應(yīng)用和生物修復(fù)等方面具有廣泛的用途。
　　本研究從黃花蒿植株中分離出一株具有漆酶活性的真菌Z-1，經(jīng)ITS1-5.8S-ITS2rDNA區(qū)域的序列鑒定，與彎孢菌屬中的唐菖蒲彎孢霉（Curvularia trifolii）的親緣關(guān)系較近，同源性可達(dá)100％。
　　通過(guò)單次單因素實(shí)驗(yàn)，確定了唐菖蒲彎孢霉合成漆

2、酶的最佳培養(yǎng)條件:接種量1％、裝液量60％（V/V），搖床轉(zhuǎn)速150 r/min，發(fā)酵液初始pH7.0，培養(yǎng)溫度29℃。對(duì)培養(yǎng)基成分的篩選表明外加有機(jī)氦源對(duì)唐莒蒲彎孢霉產(chǎn)漆酶的促進(jìn)作用大于無(wú)機(jī)氮源的促進(jìn)作用。確定最優(yōu)碳源和氮源為葡萄糖和蛋白胨，誘導(dǎo)劑為愈創(chuàng)木酚。Plackett-Burman設(shè)計(jì)結(jié)果表明發(fā)酵產(chǎn)酶高峰期（發(fā)酵72h）氯化鈣、硫酸鋅和硫酸錳是主要影響因素。
　　通過(guò)PEG濃縮，離子交換層析和凝膠過(guò)濾等純化技術(shù)對(duì)Curv

3、ularia trifoli Z-1胞外漆酶進(jìn)行了純化。最終純化倍數(shù)為2.90倍，總活力回收率為16.01％。以ABTS作為底物，Curvularia trifoli Z-1純化后的漆酶的最適反應(yīng)pH為2.6，在pH2.4～3.2之間維持較高的酶活;30℃時(shí)，純酶在pH6.0～pH8.0的緩沖液中較穩(wěn)定，而在pH2.2～pH4.0范圍內(nèi)酶活就迅速下降。純酶最適反應(yīng)溫度為40℃:在最適pH下研究漆酶對(duì)溫度的穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)45℃以下穩(wěn)定。Cur