擬南芥乙醇脫氫酶純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乙醇脫氫酶是許多有機(jī)體中主要短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶。典型的乙醇脫氫酶是一個鋅結(jié)合酶，以二聚體形式作用且依賴NAD(P)+輔助因子互變乙醇和乙醛。植物ADH的3個保守功能域分別為鋅結(jié)合位點、Rossmann折疊NAD(P)+結(jié)合蛋白和具有GroES結(jié)構(gòu)的ADH_N結(jié)構(gòu)域。這3個保守結(jié)構(gòu)在物種中具有相當(dāng)高的保守性。為了探究擬南芥乙醇脫氫酶的結(jié)構(gòu)與生化特性，本實驗構(gòu)建了擬南芥ADH蛋白的原核表達(dá)載體，純化可溶性ADH蛋白并進(jìn)行體外功能結(jié)構(gòu)試驗。主

2、要結(jié)果如下：
　　1.成功構(gòu)建得到的原核表達(dá)擬南芥ADH蛋白載體，以pET-HTT為表達(dá)載體，Rosetta為宿主表達(dá)細(xì)菌，20℃條件下0.1％IPTG誘導(dǎo)15 h，純化得到了高純度的擬南芥ADH蛋白。
　　2.利用全波長酶標(biāo)儀測量反應(yīng)產(chǎn)物NADH在340 nm的吸光度值的變化和生化反應(yīng)動力學(xué)理論，得到了擬南芥ADH酶學(xué)性質(zhì)，包括最適反應(yīng)PH為10.5，具有廣泛的底物選擇性，最適反應(yīng)底物為乙醇。最大反應(yīng)速率Vmax（NAD）

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