木蹄層孔菌漆酶的產(chǎn)生、分離純化及酶學性質(zhì)研究.pdf

1、本文通過對東北林業(yè)大學微生物及免疫學實驗室保存的27株（種）大型真菌木素氧化酶系組成、活性及對染料脫色作用的研究，篩選出木蹄層孔菌作為產(chǎn)漆酶的菌株。并進一步對該菌產(chǎn)漆酶發(fā)酵條件、漆酶的純化及酶學性質(zhì)進行了研究。獲得如下結(jié)果:
　　(1)米用丁香醛連氮、苯胺藍平板脫色等4種方法，定性檢測了株（種）大型真菌的木素氧化酶系組成。結(jié)果表明5個菌種同時具有Lac、Lip、Mnp3種酶的活性，5個菌種同時具有Lac、LiP2種酶的活性，8個菌

2、種具有1種酶的活性;12個菌種具有漆酶活性。選擇其中生長速度快、漆酶活性高的5個菌種進行漆酶產(chǎn)生的研究，發(fā)現(xiàn)木蹄層孔菌在誘導、靜止培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的漆酶酶活峰值高達9496 U/mL，遠遠高于其它已報道過的菌種，說明木蹄層孔菌靜止培養(yǎng)可代替振蕩培養(yǎng)進行漆酶產(chǎn)生的后續(xù)研究。木蹄層孔菌等5種真菌對剛果紅等4類染料均具有高效廣譜的脫色作用，其中木蹄層孔菌效果最好。
　　(2)利用正交實驗對木蹄層孔菌產(chǎn)漆酶發(fā)酵條件進行研究，得到優(yōu)化培養(yǎng)基組

3、成為(/L):淀粉20 g;藜蘆醇2.5 g;蛋白胨2.5 g;Tween800.15％; CuSO40.1 mM（調(diào)節(jié)pH至4.0，溫度為30℃）。
　　(3)通過DEAF-Sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾等純化技術(shù)對木蹄層孔菌胞外漆酶進行了純化，最終純化倍數(shù)達11.93，回收率為20.18％。
　　(4)以ABTS作為底物時木蹄層孔菌純化后的漆酶的最適pH為2.8，在pH2.0～5

4、.0之間維持較高的酶活，超過pH5.0漆酶活性急劇下降;純化后的漆酶最適反應溫度為60℃，在20～65℃范圍內(nèi)較穩(wěn)定，超過65℃酶活力下降迅速。純化后的漆酶對底物ABTS的催化效率較高，米氏常數(shù)為0.068 mmol/L。幾種漆酶的抑制劑中的NaN3、半胱氨酸和DTT對漆酶活力有強烈的抑制，而金屬離子鰲合劑EDTA對漆酶活力的抑制程度較低。Zn2+、Mg2+、Ca2+等金屬對漆酶活性有明顯的激活作用。染料降解實驗發(fā)現(xiàn)木蹄層孔菌與染料的共