木蹄層孔菌漆酶的產(chǎn)生、分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本文通過對(duì)東北林業(yè)大學(xué)微生物及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存的27株（種）大型真菌木素氧化酶系組成、活性及對(duì)染料脫色作用的研究，篩選出木蹄層孔菌作為產(chǎn)漆酶的菌株。并進(jìn)一步對(duì)該菌產(chǎn)漆酶發(fā)酵條件、漆酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。獲得如下結(jié)果:
　　(1)米用丁香醛連氮、苯胺藍(lán)平板脫色等4種方法，定性檢測(cè)了株（種）大型真菌的木素氧化酶系組成。結(jié)果表明5個(gè)菌種同時(shí)具有Lac、Lip、Mnp3種酶的活性，5個(gè)菌種同時(shí)具有Lac、LiP2種酶的活性，8個(gè)菌

2、種具有1種酶的活性;12個(gè)菌種具有漆酶活性。選擇其中生長(zhǎng)速度快、漆酶活性高的5個(gè)菌種進(jìn)行漆酶產(chǎn)生的研究，發(fā)現(xiàn)木蹄層孔菌在誘導(dǎo)、靜止培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的漆酶酶活峰值高達(dá)9496 U/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它已報(bào)道過的菌種，說明木蹄層孔菌靜止培養(yǎng)可代替振蕩培養(yǎng)進(jìn)行漆酶產(chǎn)生的后續(xù)研究。木蹄層孔菌等5種真菌對(duì)剛果紅等4類染料均具有高效廣譜的脫色作用，其中木蹄層孔菌效果最好。
　　(2)利用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)木蹄層孔菌產(chǎn)漆酶發(fā)酵條件進(jìn)行研究，得到優(yōu)化培養(yǎng)基組

3、成為(/L):淀粉20 g;藜蘆醇2.5 g;蛋白胨2.5 g;Tween800.15％; CuSO40.1 mM（調(diào)節(jié)pH至4.0，溫度為30℃）。
　　(3)通過DEAF-Sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾等純化技術(shù)對(duì)木蹄層孔菌胞外漆酶進(jìn)行了純化，最終純化倍數(shù)達(dá)11.93，回收率為20.18％。
　　(4)以ABTS作為底物時(shí)木蹄層孔菌純化后的漆酶的最適pH為2.8，在pH2.0～5

4、.0之間維持較高的酶活，超過pH5.0漆酶活性急劇下降;純化后的漆酶最適反應(yīng)溫度為60℃，在20～65℃范圍內(nèi)較穩(wěn)定，超過65℃酶活力下降迅速。純化后的漆酶對(duì)底物ABTS的催化效率較高，米氏常數(shù)為0.068 mmol/L。幾種漆酶的抑制劑中的NaN3、半胱氨酸和DTT對(duì)漆酶活力有強(qiáng)烈的抑制，而金屬離子鰲合劑EDTA對(duì)漆酶活力的抑制程度較低。Zn2+、Mg2+、Ca2+等金屬對(duì)漆酶活性有明顯的激活作用。染料降解實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)木蹄層孔菌與染料的共