具有立體選擇性環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選及手性β受體阻滯劑的生物法制備.pdf

1、在環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選過(guò)程中，本文主要以間甲基苯基縮水甘油醚為底物，以高效液相為分析方法，獲得一株具有高活力、高對(duì)映立體選擇性的環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌。經(jīng)過(guò)鑒定為巨大芽孢桿菌命名為Bacillus megaterium ZJUZQ-002。
　　 對(duì)Bacillus megaterium ZJUZQ-002進(jìn)行發(fā)酵條件優(yōu)化。發(fā)現(xiàn)菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH值和溫度對(duì)菌體的產(chǎn)量與環(huán)氧化物水解酶活力有重要影響。當(dāng)發(fā)酵pH值為7.2左右，溫

2、度為30℃時(shí)，菌體產(chǎn)量與酶活力均較好。底物誘導(dǎo)對(duì)該菌的酶活力也有重要的影響，當(dāng)?shù)孜镎T導(dǎo)量為6mmol/L時(shí)，所得菌的酶活力最好，當(dāng)?shù)孜镎T導(dǎo)的濃度高于12 mmol/L時(shí)該菌基本不生長(zhǎng)。
　　 該菌產(chǎn)生環(huán)氧化物水解酶的最佳發(fā)酵條件為：蔗糖1.0％，酵母膏1.0％，NaCl1.0％，MgSO4·7H2O5 mmol/L，K2HPO4·3H2O0.3％，KH2PO40.1％，底物6 mmol/L，溫度：30℃，pH7.2；250 mL

3、三角瓶裝30 mL，轉(zhuǎn)速200 r/min，時(shí)間30 h。在該條件下酶活可達(dá)58.5 U/L。
　　 對(duì)Bacillus megaterium ZJUZQ-002進(jìn)行拆分條件，包括溫度、緩沖液pH、助溶劑類(lèi)型、時(shí)間及催化劑與底物的質(zhì)量比等進(jìn)行研究，并確定其最佳的拆分條件。緩沖液為pH8.0、濃度為0.1 M的磷酸鉀（PKB），轉(zhuǎn)化溫度30℃，轉(zhuǎn)化時(shí)間16 h，助溶劑為DMSO，凍干細(xì)胞/底物（g/g）=9/1，底物濃度為20 m

4、mol/L；在該條件下底物的e.e。值為99.9％，其E值為37。
　　 對(duì)底物特異性的研究，發(fā)現(xiàn)菌體對(duì)鄰位和間位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類(lèi)底物有較好的對(duì)映立體選擇性，并催化水解（R）-型的環(huán)氧化物，保留（S）-型；而對(duì)于對(duì)位有甲基取代基的苯基縮水甘油醚類(lèi)底物立體選擇性稍差，且主要催化水解（S）-型的環(huán)氧化物，保留（R）-型；通過(guò)Docking研究已解釋了這一現(xiàn)象。
　　 在最適的轉(zhuǎn)化條件下，對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行了擴(kuò)大化轉(zhuǎn)