NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶條件的優(yōu)化及對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇生物轉化的研究.pdf

1、真菌毒素是由真菌或霉菌產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物，廣泛污染各種飼料原料和成品飼料。動物誤食被真菌毒素污染的飼料會造成動物的真菌毒素中毒。 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalnol，縮寫DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，屬單端孢霉烯族B族化合物，是鐮刀菌產(chǎn)生的一種真菌毒素，主要污染谷物及其制品。在自然界中廣泛存在，目前被認為是存在于赤霉病小麥中的主要天然毒素之一。 最新研究發(fā)現(xiàn)，酶可通過將這些霉菌毒素的分子分解

2、為無害的代謝物而將毒素的毒性去除。而環(huán)氧酶則可分解單端孢霉烯族茼毒素分子中的環(huán)氧基團。這些酶可以降解真菌毒素的代謝物或改變它們的分子結構來產(chǎn)生更少的毒素或者是那些可以代謝或吸收無害的成分。 本論文主要研究在于優(yōu)化NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶的條件，初步研究環(huán)氧化物水解酶的酶學性質并且生物轉化DON。 試驗I NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶條件的優(yōu)化 本實驗室從土壤中分離得到—株NAJ-1菌株。本章實驗主要是通過研究

3、碳源、氮源、金屬離子等培養(yǎng)基組分，以及pH、溫度、裝液量、添加誘導物等因素對菌株產(chǎn)酶的影響，優(yōu)化產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶的條件。實驗結果表明：在本實驗條件下此菌培養(yǎng)的最佳碳氮源組成是1％葡萄糖，1％玉米漿，培養(yǎng)基的初始pH為4.0，培養(yǎng)的最佳溫度和時間是30℃下培養(yǎng)32h，低濃度底物苯基環(huán)氧乙烷對該酶具有誘導作用，培養(yǎng)基中的金屬離子Ca2+、Mg2+對產(chǎn)酶有促進作用。 試驗II環(huán)氧化物水解酶性質的初步研究 本試驗主要是利用NJA

4、-1菌制備EH初酶液，并且用制備的初酶液進行環(huán)氧化物水解酶(EH)酶學性質的初步研究.試驗結果表明，EH的最造反應溫度是30℃，最適pH是pH7.0；25～40℃范圍內(nèi)酶具有較好的熱穩(wěn)定性，pH6.5～8.0范圍內(nèi)酶的穩(wěn)定性較佳，Mg2+、Ca2+離子可促進酶活，有機溶劑DMSO可輕微促進EH酶活。 試驗III菌體及初酶液對DON的轉化 本實驗采用菌體及制備的初酶液和EH酶液，加入不同濃度的DON(濃度分別為：4μg/m