NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶條件的優(yōu)化及對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇生物轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、真菌毒素是由真菌或霉菌產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛污染各種飼料原料和成品飼料。動(dòng)物誤食被真菌毒素污染的飼料會(huì)造成動(dòng)物的真菌毒素中毒。 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalnol，縮寫(xiě)DON)又稱(chēng)嘔吐毒素(vomitoxin)，屬單端孢霉烯族B族化合物，是鐮刀菌產(chǎn)生的一種真菌毒素，主要污染谷物及其制品。在自然界中廣泛存在，目前被認(rèn)為是存在于赤霉病小麥中的主要天然毒素之一。 最新研究發(fā)現(xiàn)，酶可通過(guò)將這些霉菌毒素的分子分解

2、為無(wú)害的代謝物而將毒素的毒性去除。而環(huán)氧酶則可分解單端孢霉烯族茼毒素分子中的環(huán)氧基團(tuán)。這些酶可以降解真菌毒素的代謝物或改變它們的分子結(jié)構(gòu)來(lái)產(chǎn)生更少的毒素或者是那些可以代謝或吸收無(wú)害的成分。 本論文主要研究在于優(yōu)化NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶的條件，初步研究環(huán)氧化物水解酶的酶學(xué)性質(zhì)并且生物轉(zhuǎn)化DON。 試驗(yàn)I NJA-1菌產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶條件的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)室從土壤中分離得到—株NAJ-1菌株。本章實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)研究

3、碳源、氮源、金屬離子等培養(yǎng)基組分，以及pH、溫度、裝液量、添加誘導(dǎo)物等因素對(duì)菌株產(chǎn)酶的影響，優(yōu)化產(chǎn)環(huán)氧化物水解酶的條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在本實(shí)驗(yàn)條件下此菌培養(yǎng)的最佳碳氮源組成是1％葡萄糖，1％玉米漿，培養(yǎng)基的初始pH為4.0，培養(yǎng)的最佳溫度和時(shí)間是30℃下培養(yǎng)32h，低濃度底物苯基環(huán)氧乙烷對(duì)該酶具有誘導(dǎo)作用，培養(yǎng)基中的金屬離子Ca2+、Mg2+對(duì)產(chǎn)酶有促進(jìn)作用。 試驗(yàn)II環(huán)氧化物水解酶性質(zhì)的初步研究 本試驗(yàn)主要是利用NJA

4、-1菌制備EH初酶液，并且用制備的初酶液進(jìn)行環(huán)氧化物水解酶(EH)酶學(xué)性質(zhì)的初步研究.試驗(yàn)結(jié)果表明，EH的最造反應(yīng)溫度是30℃，最適pH是pH7.0；25～40℃范圍內(nèi)酶具有較好的熱穩(wěn)定性，pH6.5～8.0范圍內(nèi)酶的穩(wěn)定性較佳，Mg2+、Ca2+離子可促進(jìn)酶活，有機(jī)溶劑DMSO可輕微促進(jìn)EH酶活。 試驗(yàn)III菌體及初酶液對(duì)DON的轉(zhuǎn)化 本實(shí)驗(yàn)采用菌體及制備的初酶液和EH酶液，加入不同濃度的DON(濃度分別為：4μg/m