膠體金標(biāo)記四環(huán)素類(lèi)抗生素單克隆抗體探針的研究.pdf

1、四環(huán)素類(lèi)抗生素廣泛應(yīng)用于畜牧、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，其大量頻繁和不當(dāng)?shù)氖褂靡鹆藝?yán)重的藥物殘留問(wèn)題。四環(huán)素類(lèi)抗生素在動(dòng)物源性食品中的殘留，通過(guò)食物鏈危害人體健康，引起嚴(yán)重的過(guò)敏性反應(yīng)，致畸、致癌、致突變作用。因而建立快速、靈敏、準(zhǔn)確的四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留檢測(cè)的方法刻不容緩。
　　目前，應(yīng)用于四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留的檢測(cè)方法主要有儀器分析法、免疫方法、化學(xué)發(fā)光分析方法等。如高效液相色譜，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜，酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。這些方法具有精確度高

2、、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。但其存在操作繁瑣、樣品處理復(fù)雜、成本高、不適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等缺點(diǎn)。因而，迫切需要一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確、適時(shí)實(shí)地的檢測(cè)四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留的方法。
　　膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）具有快捷迅速、靈敏準(zhǔn)確；安全簡(jiǎn)便，不需任何儀器和設(shè)備；外界因素影響較小，適合進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；成本低廉，所需試劑和樣本量少。然而要建立膠體金免疫層析技術(shù)，必須首先制備膠體金標(biāo)記抗體探針。
　　因此，本研究的目的是建立穩(wěn)定分泌四環(huán)素類(lèi)抗生素

3、抗體的雜交瘤細(xì)胞株、制備四環(huán)素類(lèi)抗生素單克隆抗體，制備生物活性膠體金標(biāo)記四環(huán)素類(lèi)抗生素抗體探針、以用于四環(huán)素殘留檢測(cè)的膠體金免疫層析技術(shù)中。
　　首先采用鄰聯(lián)甲苯胺法和碳化二亞胺法將4種四環(huán)素類(lèi)抗生素（四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素）與牛血清白蛋白和卵清白蛋白偶聯(lián)分別制得人工免疫抗原及包被抗原。通過(guò)紫外波長(zhǎng)掃描與偶聯(lián)率分析，將最佳人工免疫原進(jìn)一步采用紅外光譜鑒定偶聯(lián)情況，結(jié)果表明偶聯(lián)成功。
　　用最佳人工免疫抗原免疫BAL

4、B/c雌性小鼠，當(dāng)間接ELISA測(cè)定小鼠抗血清效價(jià)達(dá)到1:6400以上時(shí)，取高效價(jià)血清小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用建立的間接ELISA法篩選陽(yáng)性孔?？寺￡?yáng)性雜交瘤細(xì)胞株獲得土霉素、金霉素單克隆的細(xì)胞株，鑒定單克隆抗體亞型。
　　培養(yǎng)土霉素、金霉素單克隆陽(yáng)性細(xì)胞株，腹水誘生制備土霉素、金霉素單克隆抗體。收集腹水，經(jīng)辛酸-硫酸銨法純化、透析除鹽獲得土霉素、金霉素單克隆抗體。土霉素、金霉素單克隆抗體經(jīng)膠體金標(biāo)記，獲