薯蕷皂素和睪酮在維吉尼鏈霉菌IBL14中的生物轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、甾體化合物廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，許多具有各種各樣的生物活性，它們的應(yīng)用也非常廣泛，有些被采用治療疾病，或發(fā)展生產(chǎn)新的藥劑，例如治療過(guò)敏疾病的氫化可的松，避孕藥品黃體酮、利尿劑安體舒通、用于合成甾體激素的薯蕷皂甙元、強(qiáng)心作用的狄戈辛、蟾毒甙等都是甾體化合物。甾體激素具有很強(qiáng)的抗感染、抗過(guò)敏、抗病毒和抗休克的藥理作用，是治療風(fēng)濕、心血管、淋巴白血病、細(xì)胞性腦炎、皮膚病、抗腫瘤和搶救危重病人的重要用藥。
　　 在制藥工業(yè)中，甾體類化合

2、物是市場(chǎng)需求最大的產(chǎn)品。薯蕷皂素是生產(chǎn)各種甾體激素類藥物的重要基礎(chǔ)原料。睪酮又稱睪丸素、睪丸酮或睪甾酮，也是一種類固醇荷爾蒙，它是由男性的睪丸或者女性的卵巢分泌，腎上腺也分泌少量睪酮，它具有維持肌肉強(qiáng)度以及質(zhì)量、并且還具有維持骨質(zhì)密度強(qiáng)度、提神及提升體能等作用。睪酮影響許多身體系統(tǒng)和功能，其中包括：血液生成，體內(nèi)鈣的平衡，骨礦化作用，脂代謝，以及糖代謝和前列腺增長(zhǎng)。
　　 本文通過(guò)篩選的一株新維吉尼鏈霉菌菌株對(duì)薯蕷皂素和睪酮進(jìn)行

3、轉(zhuǎn)化代謝，分離鑒定其代謝衍生物，研究薯蕷皂素和睪酮的代謝機(jī)制，包括其中的水解酶，裂解酶，甲氧基化酶，以及羥化酶基因的克隆表達(dá)鑒定等工作。
　　 首先一開始先對(duì)這株新菌株的培養(yǎng)進(jìn)行優(yōu)化研究，建立一套合適的培養(yǎng)工藝，接著對(duì)新菌株的代謝特點(diǎn)研究，結(jié)果顯示甾體類化合物的投料時(shí)機(jī)對(duì)新菌株的轉(zhuǎn)化和降解具有重大影響。
　　 新菌株對(duì)睪酮的代謝中鑒定出了ADD，3，4-HAS，4，9-DHSA等衍生物。對(duì)薯蕷皂素的代謝中，鑒定了分子量為

4、412，410,428等衍生物，有利于發(fā)現(xiàn)具有新的生理活性的甾體類藥物。
　　 構(gòu)建薯蕷皂素和睪酮在新菌株中的代謝路徑，確定其中具有重要意義的酶反應(yīng)，包括其中的裂解酶和水解酶反應(yīng)。將其水解酶和裂解酶基因通過(guò)序列對(duì)比，設(shè)計(jì)合適的引物克隆出來(lái)，并連接到質(zhì)粒pET22b上，轉(zhuǎn)入在大腸桿菌JM109(DE3)中，通過(guò)添加IPTG誘導(dǎo)重組菌株表達(dá)相應(yīng)蛋白。
　　 在新菌株的代謝途徑中，還發(fā)現(xiàn)了2個(gè)新穎的反應(yīng)，25位的叔碳羥基化反應(yīng)