生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)β-丙氨酸的研究.pdf

1、本論文通過對紙層析法、高錳酸鉀滴定法和高效液相色譜的比較，建立了HPLC-ELSD直接檢測β-丙氨酸的新方法。該方法色譜條件為：色譜柱為5μm Alltech氨基柱，柱溫為40℃，流動相為甲醇：水=5:1，流速為1.0mL/min，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器Alltech2000(U.S.A.)，檢測器工作條件為飄移管溫度85℃，氣體流速2.2L/min。
　　 從全國8個地點采集土壤，篩選到26株耐丙烯酸菌株。將26株菌株和藤黃

2、八疊球菌(Sarcine luted)同時發(fā)酵、轉(zhuǎn)化后比較產(chǎn)β-丙氨酸合成酶能力，結(jié)果藤黃八疊球菌轉(zhuǎn)化得到的β-丙氨酸含量為0.102g/L，高于其他26株菌株。
　　 對藤黃八疊球菌進行60Coγ射線誘變和紫外誘變，在高濃度丙烯酸培養(yǎng)基和發(fā)酵殘液培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選得到β-丙氨酸合成酶產(chǎn)生菌TH0517A，β-丙氨酸合成酶活力為20.5U，較誘變前提高酶活28.97％。
　　 采用單因素及正交實驗法，對誘變株TH0517

3、A酶合成條件進行優(yōu)化，優(yōu)化后的酶合成條件：可溶性淀粉2.3g，硝酸鉀0.8g，H3BO33.4μg，ZnSO48.1μg，MgSO4·7H2O0.02g，KH2PO40.7g，NaCl0.145g，定容100mL，NaOH調(diào)pH7.0，發(fā)酵溫度30℃，轉(zhuǎn)速200 r/min，發(fā)酵時間18h。通過對酶合成條件的優(yōu)化，突變株TH0571A酶活達到了54.4U，較優(yōu)化前提高了200.41％。
　　 對轉(zhuǎn)化工藝條件進行單因素優(yōu)化實驗，優(yōu)

4、化后的工藝條件為：二級發(fā)酵液發(fā)酵完畢后，直接作為酶液使用；轉(zhuǎn)化液配方：6％丙烯酸，1％10-5mol/LZnSO4，1％10-5mol/L CuSO4，0.02％MgSO4.7H2O，配置方法：添加丙烯酸后，用0.1％Ca(OH)2調(diào)節(jié)pH值至7.0，冷卻至室溫，然后添加各種離子，最后氨水調(diào)pH值至10.0。轉(zhuǎn)化時每15mL轉(zhuǎn)化液添加9mL發(fā)酵液，30℃轉(zhuǎn)化10h。實驗結(jié)果顯示，突變株TH0571A轉(zhuǎn)化率達到了1.25％，較優(yōu)化前提高了