頭孢霉DT06抑菌物質(zhì)分離提取及理化性質(zhì)初步研究.pdf

1、頭孢霉DT06是本實(shí)驗(yàn)室從藍(lán)藻中分離出來(lái)的一株內(nèi)生真菌。前期研究表明該真菌不但能夠分泌大量的胞外多糖,同時(shí)還能產(chǎn)生抑制金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的物質(zhì)。本文主要針對(duì)菌株DT06產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)進(jìn)行研究,主要研究結(jié)果如下:
　　在對(duì)頭孢霉DT06產(chǎn)抑菌物質(zhì)優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)中,確定最佳碳源為蔗糖,氮源為蛋白胨,但研究發(fā)現(xiàn)該菌株不能利用硝酸銨、硝酸鈉作為氮源合成抑菌物質(zhì)。氨基酸對(duì)抗生素影響實(shí)驗(yàn)中,亮氨酸、纈氨酸能有效促

2、進(jìn)抗生素的合成,最佳濃度分別為1.0g/L和2.0g/L;蛋氨酸、半胱氨酸的加入不但抑制菌體細(xì)胞生長(zhǎng),而且阻礙原有抑菌物質(zhì)合成。在培養(yǎng)條件單因素實(shí)驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)中,確定最佳發(fā)酵條件組合為:接種量為1％,pH為6.5,裝液量為60/250ml,加入攪拌玻璃珠為9個(gè)。優(yōu)化后抑菌物質(zhì)的產(chǎn)量提高約79%。
　　通過(guò)對(duì)菌株DT06的發(fā)酵液進(jìn)行處理,確定了醇沉法能夠有效去除多糖雜質(zhì),活性炭可以吸附發(fā)酵液中的色素。對(duì)于抑菌活性物質(zhì)的分離提取主

3、要采用雙水相法、硫酸銨沉淀法和大孔樹(shù)脂吸附法。聚乙二醇/硫酸銨雙水相體系中兩種物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11%/23%時(shí)分離效果最好。當(dāng)硫酸銨的最佳飽和度為30%時(shí),可用來(lái)除去發(fā)酵液中的雜蛋白,繼續(xù)追加硫酸銨飽和度為90%可對(duì)抗生素物質(zhì)進(jìn)行有效沉淀。大孔樹(shù)脂篩選實(shí)驗(yàn)確定CT-12型樹(shù)脂對(duì)抑菌物質(zhì)的處理效果最好,不僅在有效分離的同時(shí)也不引入新的雜質(zhì)。
　　抑菌物質(zhì)pH、溫度、儲(chǔ)存穩(wěn)定性試驗(yàn)表明,該物質(zhì)在中性或堿性條件下穩(wěn)定,酸性條件下易分解;