芳基丙酸類非甾體抗炎藥物抗壞血酸酯化衍生物的酶法合成研究.pdf

1、本文以酮洛芬和L-抗壞血酸為原料,以脂肪酶Novozym435為主要催化劑,對其酶法合成進行研究。結果表明,酮洛芬能與L-抗壞血酸發(fā)生酯化反應,得到L-抗壞血酸酮洛芬酯(酮洛芬維C酯)。在合成的過程中使用高效液相色譜-紫外檢測法、碘滴定法分析非水相酶促反應合成產物中的酮洛芬維C酯。該方法具有快速、準確、簡便等特點。
　　 研究了三種芳基丙酸類非甾體抗炎藥物L-抗壞血酸衍生化的合成工藝,并對反應條件進行優(yōu)化。首先,對三種脂肪酶進行

2、篩選;然后,建立了反應初速度的判定方法;最后,分別考察了底物濃度、不同溶劑、酶質量分數、反應溫度、搖床轉速對反應初速度的影響。結表明:Novozym435和TLIM能夠催化反應并獲得目標產物。通過比較,發(fā)現(xiàn)在單位時間內Novozym435催化的反應產物生成量高于TLIM催化的反應。最終以反應初速度為判定標準,實驗確定了反應的最佳工藝條件。
　　 對于特定的酶催化反應體系,研究酶的反應動力學十分重要。本文從研究濃度因素的有關實驗求

3、出速度常數,研究了酶促有機合成L-抗壞血酸洛芬酯的反應動力學,并確定了酶促反應動力學參數。結果表明:三種底物中,布洛芬與酶的親和力最大,酮洛芬次之,氟比洛芬最小。并且發(fā)現(xiàn)以布洛芬和酮洛芬為底物的酶促反應中,存在底物抑制作用。通過建立單底物抑制模型,求得底物抑制反應中的抑制常數及動力學常數。
　　 從熱力學角度看,由于酶和反應物形成了絡合物,降低了反應的活化能,促進了反應進程。酶能夠促進生化反應的速率,但不能改變反應方向和化學平衡

4、。本文研究了酶促反應的平衡時間、平衡產物濃度,計算得到酶促反應熱力學平衡常數,并考察了Novozym435脂肪酶的穩(wěn)定性。結果表明:布洛芬與L-抗壞血酸成酯的最優(yōu)條件:轉速200r/min,溫度65℃,加酶量5％(以底物的質量分數計),底物濃度1000mmol/L,平衡所需時間66h,平衡時產物質量分數為19.07％;酮洛芬與L-抗壞血酸成酯的最優(yōu)條件:200r/min,60℃,加酶量7.5％,底物濃度600mmol/L,平衡時間132

5、h,質量分數為10.63％;氟比洛芬與L-抗壞血酸成酯的最優(yōu)條件:200r/min,65℃,加酶量5％,底物濃度400mmol/L,平衡時間144h,質量分數為6.76％。對底物進行了比較,得到了各自的動力學與熱力學參數。布洛芬:米氏常數Km=0.101μmol/L,Vmax=32.68μmol/(min·g),熱力學平衡常數K=0.166;酮洛芬:Km=0.144μmol/L,Vmax=12.97μmol/(min·g),K=0.09