痤瘡丙酸桿菌中脂肪酶基因的原核表達及其應用.pdf

1、本文實現(xiàn)了痤瘡丙酸桿菌脂肪酶的基因克隆表達，并對重組酶的酶學性質和降解作用進行研究。從痤瘡丙酸桿菌基因組中克隆脂肪酶基因(liphy)，與pUCm-T載體連接，構建克隆載體pUCm-T-liphy。測序正確后，將liphy亞克隆至表達載體pET-15b連接，構建充足表達質粒pET-15b-liphy，轉化到宿主菌BL21(DE3)PlysS后經IPTG誘導表達，SDS-PAGE電泳結果顯示分子量約為37kDa的特異性條帶，但較多部分以包

2、涵體形式存在。優(yōu)化表達條件，確定最優(yōu)條件為:pH6.0，30℃培養(yǎng)，轉接量1∶60，IPTG終濃度0.4mM，誘導24h。采用Ni柱對表達產物進行純化，SDS-PAGE分析表明，純化后條帶單一，酶的純度達到95％以上，純化回收率為37.25％。酶學性質研究表明，該酶反應的比活力為91.43U/ml，最適pH為9.5;最適溫度為30℃;具有一定的熱穩(wěn)定性。此外，Mg2+和Ca+對酶活有一定的促進作用，而Co2+、Fe3+、Cu2+、Zn2