擴展青霉脂肪酶基因在釀酒酵母中的表達(dá)及分子突變.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩77頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、該論文報道了擴展青霉堿性脂肪酶(Penicillium expansum lipase,PEL)成熟肽基因lip及帶有自身信號肽的基因lip07在釀酒酵母中的表達(dá),對釀酒酵母表達(dá)脂肪酶的發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,并運用定點突變技術(shù)對PEL基因第227位氨基酸殘基進(jìn)行分子突變.將堿性脂肪酶基因lip、lip07分別連接到釀酒酵母表達(dá)載體,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pVT102U/α-lip、pVT102U/α-L-lip07,并分別電轉(zhuǎn)入釀酒酵母Sacch

2、aromyces cerevisiaw S78,篩選重組菌株S78-pVT102U/α-lip及S78-pVT102U/α-L-lip07.結(jié)果表明lip及l(fā)ip07均獲得了分泌表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物分泌到培養(yǎng)基中,分子量約為28kDa,與天然擴展青霉脂肪酶基本一致.其中,重組酵母S78-pVT102U/α-lip搖瓶發(fā)酵72h,酶活可達(dá)20U/ml;S78-pVT102U/α-L-lip07表達(dá)的脂肪酶很少,表達(dá)產(chǎn)物僅在三丁酸甘油酯平板上形成

3、透明圈.從移種量、培養(yǎng)基pH、碳源及培養(yǎng)基組成等方面對S78-pVT102U/α-lip進(jìn)行初步的發(fā)酵條件優(yōu)化,結(jié)果表明:適宜的培養(yǎng)基組成為3％酵母抽提物、3%胰化蛋白胨、2%蔗糖;移種量為1.3%;起始pH為7.0,28℃搖瓶發(fā)酵72h,上清液酶活達(dá)56U/ml,為優(yōu)化前的2.8倍.采用重疊延伸PCR方法將脂肪酶第227位絲氨酸突變?yōu)楦彼?將突變后的基因lip-S227P克隆到畢赤酵母表達(dá)載體,將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pPPIC3.5K-l

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論