丹參及其復方制劑多指標成分質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、丹參為常用中藥,中醫(yī)理論認為,丹參性味苦,微寒。歸心、肝經(jīng)。具有祛淤止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之功效。據(jù)統(tǒng)計,已應用于臨床的丹參制劑達上百種,丹參的化學成分主要分為兩類,脂溶性二萜醌類和水溶性酚酸類。
　　 藥品的質(zhì)量可控性是藥品的基本屬性,是藥品的安全性和有效性的基礎。經(jīng)查閱大量文獻,多種丹參制劑的質(zhì)量控制方法已有報道,但其中仍有一些丹參制劑的質(zhì)量控制方法為空白或只有以其中一種或兩種有效成分作為質(zhì)量控制指標的報道,不能全面評價藥

2、品的內(nèi)在質(zhì)量,還有一些質(zhì)量控制方法需要進一步改進和完善。
　　 本課題選定六種丹參復方制劑心可寧膠囊、心可舒膠囊、冠心寧注射液、丹參滴注液、丹香冠心注射液、丹參粉針劑和丹參飲片,以制劑中君藥丹參及其它主要味藥的多指標成分作為質(zhì)量控制指標,采用反相高效液相二極管陣列檢測法,對藥物的質(zhì)量控制進行了較為系統(tǒng)的方法學研究。建立了同時測定心可寧膠囊、心可舒膠囊和冠心寧注射液中六種有效成分的反相高效液相色譜法;丹參滴注液和丹香注射液中五種水

3、溶性成分的高效液相色譜法;丹參滴注液和丹參粉針劑中四種有效成分的高效液相色譜法以及丹參飲片中五種水溶性成分的高效液相色譜法。所建立的方法專屬性強,靈敏度高、精密度和穩(wěn)定性良好,可用于全面評價上述丹參復方制劑和丹參飲片的質(zhì)量。
　　 第一部分丹參復方膠囊制劑多指標成分質(zhì)量控制方法研究
　　 (一)反相高效液相色譜法同時測定心可寧膠囊中六種成分的含量
　　 目的:建立反相高效液相色譜二極管陣列檢測法(RP-HPLC-

4、DAD)同時測定心可寧膠囊中丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量。為心可寧膠囊提供一種以水溶性和脂溶性兩類成分同時作為質(zhì)量控制指標的分析方法。
　　 方法:(1)提取方法:考察不同提取溶劑及提取時間對心可寧膠囊有效成分的提取效率,選擇提取成分多,提取效率高的提取方法。(2)反相高效液相色譜條件的優(yōu)化:選擇合適的固定相,調(diào)整流動相,設計梯度洗脫程序及檢測方法等色譜條件,以使被測組分色譜峰與其它峰完全分離

5、。(3)系統(tǒng)適用性試驗:在已確定的色譜條件下,考察6種被測組分色譜峰的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。(4)制備標準曲線;進行最低檢測限試驗、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗和重復性試驗。(5)加樣回收率試驗。(6)含量測定。
　　 結(jié)論:采用反相高效液相色譜二極管陣列檢測法同時測定心可寧膠囊中丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量。該方法分析時間短、專屬性好、準確度高,可用于綜合評價心可寧膠囊的質(zhì)量

6、。
　　 (二)反相高效液相色譜法測定心可舒膠囊中六種成分的含量
　　 目的:建立了反相高效液相色譜法測定心可舒膠囊中的6種有效成分——丹參素、原兒茶醛、葛根素、丹酚酸B、隱丹參酮和丹參酮ⅡA。
　　 方法:采用DiamonsilTMC18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1％冰醋酸水溶液為流動相,進行梯度洗脫,流速1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長270 nm。
　　 結(jié)論:

7、采用高效液相色譜二極管陣列檢測法可同時測定心可舒膠囊中丹參素、原兒茶醛、葛根素、丹酚酸B、隱丹參酮和丹參酮ⅡA的含量,該方法具有分析時間短,線性范圍寬,專屬性強,準確度高等優(yōu)點,可用于綜合評價心可舒膠囊的質(zhì)量。
　　 第二部分丹參復方注射劑類藥物多指標成分質(zhì)量控制方法研究
　　 (一)高效液相色譜-二極管陣列檢測法測定冠心寧注射液中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸B
　　 目的:建立高效液相色

8、譜-二極管陣列檢測法同時測定冠心寧注射液中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸B6種水溶性成分的含量。
　　 方法:采用DiamonsilTMC18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流動相為甲醇-5％冰醋酸,進行梯度洗脫;體積流量1.0 mL/min;進樣體積20μL;柱溫30℃,檢測波長286 nm。
　　 結(jié)論:采用反相高效液相色譜法可同時測定冠心寧注射液中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、阿魏

9、酸、迷迭香酸和丹酚酸B的含量。該方法簡單、準確、重現(xiàn)性好,可用于冠心寧注射液的質(zhì)量控制。
　　 (二)反相高效液相色譜二極管陣列檢測法同時測定丹參類注射液中5種水溶性成分的含量
　　 目的:建立反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時測定丹參類注射液中5種水溶性成分丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的含量。
　　 方法:采用DiamonsilTM C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲

10、醇-5％冰醋酸為流動相,進行梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長298 nm。
　　 結(jié)論:采用反相高效液相色譜法,同時測定丹參類注射液中丹參素、原兒茶酸、原兒茶酸、迷迭香酸和丹酚酸B的含量。該法分析時間短,柱效高,重現(xiàn)性好,為丹參類注射液的綜合質(zhì)量控制提供了簡單、準確的分析方法。
　　 (三)高效液相色譜二極管陣列檢測法同時測定丹參滴注液中四種水溶性成分的含量
　　 目的:建立了反相高效液

11、相色譜-二極管陣列檢測(RP-HPLC-DAD)法同時測定丹參滴注液中丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B四種水溶性成分的含量。
　　 方法:采用DiamonsilTM C18色譜柱(250×4.6 mm,5μm),以甲醇和5％冰乙酸為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長為286 nm。
　　 結(jié)果:在此色譜條件下四種水溶性成分可完全分離。丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的線性范圍分別

12、為0.2192～1.934μg(r=0.9999),0.0351～0.2456μg(r=1.0000),0.2592～1.814μg(r=1.0000),0.3864～2.705μg(r=0.9999)。平均回收率丹參素為102.6％,相對標準偏差(RSD)為0.55％;原兒茶醛為103.5％,RSD為0.42％;迷迭香酸為99.8％,RSD為0.68％;丹酚酸B為102.8％,RSD為0.49％。
　　 結(jié)論:該方法簡單、快速

13、,四組分分離良好,可用于丹參滴注液的質(zhì)量控制。
　　 (四)反相高效液相色譜二極管陣列檢測法同時測定丹參粉針劑中4種水溶性成分的含量
　　 目的:建立反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法(RP-HPLC-DAD)同時測定丹參粉針劑中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、迷迭香酸4種水溶性成分的含量。
　　 方法:采用DiamonsilTM C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-5％冰醋酸為流動相,進行梯

14、度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長為298 nm。
　　 結(jié)果:在此色譜條件下,4種水溶性成分完全分離。丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛和迷迭香酸的線性范圍分別為0.1644～2.630μg(r=0.9999),0.007420～0.1187μg(r=1.0000),0.008770～0.1403μg(r=1.0000),0.01944～0.3110μg(r=1.0000)。平均回收率丹參素為101.6％(RSD

15、=1.1％),原兒茶酸為102.2％(RSD=1.8％),原兒茶醛為101.3％(RSD=2.0％),迷迭香酸為100.9％(RSD=1.6％)
　　 結(jié)論:采用反相高效液相色潽-二極管陣列檢測法測定丹參粉針劑中丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛和迷迭香酸的含量。該方法簡單、快速,4組分分離良好,可用于丹參粉針劑的質(zhì)量控制。
　　 第三部分反相高效液相色譜二極管陣列檢測法同時測定丹參飲片中5種水溶性成分的含量
　　 目的

16、:建立反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法(RP-HPLC-DAD)同時測定丹參飲片中5種水溶性成分丹參素、原兒茶酸、原兒茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B的含量。
　　 方法:采用DiamonsilTM C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇和5％(v/v)冰醋酸為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長為298 nm。
　　 結(jié)果:在此色譜條件下5種水溶性成分可完全分離。丹參素、原

17、兒茶酸、原兒茶酸、迷迭香酸和丹酚酸B的線性范圍分別為0.5480～3.836μg(r=0.9992),0.0148～0.1039μg(r=0.9999),0.0105～0.07367μg(r=0.9999),0.0454～0.3175μg(r=0.9999),0.1546～1.082μg(r=0.9999)。平均回收率丹參素為100.7％(RSD=0.96％),原兒茶酸為100.8％(RSD=1.0％),原兒茶醛為100.6％(RSD=