復(fù)方苦參注射液化學(xué)成分和質(zhì)量控制研究.pdf

1、復(fù)方苦參注射液(Compound Kushen Injection，CKI)又名巖舒注射液，收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第14冊(cè)，由苦參和白土苓兩味藥提取精制而成，具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫等功效，主要用于減輕癌痛。苦參來源于豆科槐屬植物苦參Sophora flavescens Ait的干燥根，白土苓為百合科肖菝葜屬植物肖菝葜Heterosmilacis.japonica Kunth.、短柱肖菝葜H.yunnanensis Gapnep.或華肖

2、菝葜H.chinensis Wang.的干燥塊莖。CKI以兩味藥粉末(苦參1400g、白土苓600g)為原料，經(jīng)1％醋酸水浸漬滲漉提取，藥渣水提，合并濃縮，反復(fù)醇沉、活性碳脫色及NaOH調(diào)pH，加注射用水而得。
　　本文以CKI為研究對(duì)象，通過化學(xué)分離、化合物結(jié)構(gòu)鑒定及LC-MS成分指認(rèn)等方法明確其物質(zhì)基礎(chǔ)，初步建立了CKI指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)現(xiàn)有CKI質(zhì)量控制方法進(jìn)行優(yōu)化，為中藥大品種技術(shù)改造，生產(chǎn)更加安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定可控的中

3、藥注射液奠定基礎(chǔ)。
　　研究采用HPD100大孔樹脂對(duì)注射液進(jìn)行粗分，經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20、ODS和半制備液相色譜純化，從中分離得到了11個(gè)化合物；通過各種波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)，鑒定了化合物的結(jié)構(gòu)，均為首次從該注射液中分離得到，分別是番石榴酸、大澤米苷、腺嘌呤、氧化苦參堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐果堿、N-甲基金雀花堿、鷹靛葉堿、鵝掌楸苷和三葉豆紫檀苷。通過對(duì)LC-MS數(shù)據(jù)分析，指認(rèn)了注射液中其它12個(gè)微量

4、成分，包括5α，9α-羥基苦參堿、氧化槐花醇、氧化槐定堿、9α-羥基槐果堿、槐定堿、槐花醇、異槐果堿、7，11-去氫苦參堿、5，6-dehydrolupanlne、9α-羥基苦參堿、lamprolobine和異苦參堿。
　　為了全面地反映CKI所含化學(xué)成分的種類和數(shù)量，提高產(chǎn)品批與批間的穩(wěn)定性，本研究初步建立了CKI指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)。采用Luna，C18色譜柱(4.6 mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相A：0.01 mol·L-1醋酸

5、銨水溶液(氨水調(diào)pH值8.0)，流動(dòng)相B：乙腈-0.01 mol·L-1的醋酸銨水溶液=9:1，線性梯度洗脫：0 min→60 min，A：B=100:0→A：B=60:40；流速為0.8 mL·min-1；柱溫為35℃：檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm。在上述色譜條件下共測(cè)試了27批CKI樣品，使用《中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件》以生成的對(duì)照指紋圖譜為參照進(jìn)行相似度分析，其中24批相似度均在0.85以上；選擇各批注射液色譜圖中均存在的色譜峰作為共

6、有峰，8個(gè)共有峰占總峰面積的百分比依次為28.2％、3.3％、20.6％、7.9％、2.8％、10.3％、4.9％和1.9％，它們的百分比之和為80.0％。暫定復(fù)方苦參注射液指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)為：供試品的圖譜應(yīng)與對(duì)照指紋譜圖一致；用氧化苦參堿及對(duì)照指紋譜圖中標(biāo)示的色譜峰校正后，相似度應(yīng)不低于0.85。
　　針對(duì)CKJ現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-2752-97)采用酸堿滴定法測(cè)定總生物堿的含量，對(duì)其中非生物堿成分沒有質(zhì)量控制指標(biāo)，不能有效地

7、控制CKI的產(chǎn)品質(zhì)量等問題，開展了CKI質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升工作。選取CKI中含量較高，且有抗腫瘤活性的氧化苦參堿、氧化槐果堿、N-甲基金雀花堿、苦參堿、槐果堿和黃酮類主要成分三葉豆紫檀苷作為質(zhì)控指標(biāo)，建立了CKI中6個(gè)主要成分的HPLC同步測(cè)定方法。采用Luna C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫35℃；流動(dòng)相A：0.01mol·L-1醋酸銨水溶液(氨水調(diào)節(jié)pH=8.0)，流動(dòng)相B：乙腈：0.01mol·L-1醋酸銨水溶液=3

8、:2；線性梯度洗脫：0min，A：B=80:20，8min，A：B=50:50，10min，A：B=47:53，25min，A：B=40:60：流速：0.8mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)225nm。方法學(xué)考察結(jié)果表明方法穩(wěn)定、可靠。采用建立的方法測(cè)定了2008年至2010年隨機(jī)抽取的19批CKI樣品，結(jié)果表明，各樣品均含有氧化苦參堿、氧化槐果堿、N-甲基金雀花堿、苦參堿、槐果堿和三葉豆紫檀苷，但是不同批次樣品之間各指標(biāo)成分含量存在差異。此方