基因工程菌產(chǎn)中性纖維素酶的研究.pdf

1、中性纖維素酶在牛仔服的水洗整理中具有重要的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。本文對產(chǎn)中性纖維素酶的重組畢氏酵母及重組里氏木霉菌株進(jìn)行了一系列篩選工作，并對篩選出的優(yōu)良轉(zhuǎn)化子的發(fā)酵性能進(jìn)行了研究，確立了適宜的發(fā)酵工藝，并進(jìn)一步對幾種中性纖維素酶在牛仔服水洗整理中的應(yīng)用效果進(jìn)行了比較研究。從282個(gè)重組畢氏酵母轉(zhuǎn)化子中篩選到一個(gè)優(yōu)良轉(zhuǎn)化子，編號Pichia pastorisY J5，該轉(zhuǎn)化子的適宜發(fā)酵條件為:250mL三角瓶裝液量30mL，培養(yǎng)基起始pH4.8

2、、此后不加控制，接種量10％，發(fā)酵過程中每隔24h補(bǔ)加1％的甲醇，發(fā)酵240h中性纖維素酶活力可達(dá)1144U/mL。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明:重組畢氏酵母中性纖維素酶的適宜催化條件為:50℃、pH6.0; Zn2+和Mg2+對該酶有激活作用，F(xiàn)e2+、Fe3+和Cu2+對該酶有抑制作用。
　　 從407個(gè)重組里氏木霉轉(zhuǎn)化子中篩選到一個(gè)優(yōu)良菌株(Trichoderma reeseiHI3)，優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:以乳糖和微晶纖維素為復(fù)合

3、碳源，玉米漿粉0.9％，C/N為7，培養(yǎng)基pH值不加調(diào)控、接種量10％、搖床轉(zhuǎn)速220rpm，發(fā)酵240h中性纖維素酶活力可達(dá)3012U/mL。進(jìn)一步采用分批補(bǔ)料培養(yǎng)工藝(fed-batchprocess)，在發(fā)酵120h后開始補(bǔ)加料液（含15％乳糖，C/N為5），每隔24h補(bǔ)加1mL，發(fā)酵288h中性纖維素酶活力可達(dá)5433U/mL以上。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明:該酶的適宜催化條件為50℃，pH6.0。該酶的作用溫度和pH范圍都較廣，溫度

4、為50℃-60℃時(shí)，pH值為5.0-7.5時(shí)酶的相對酶活力仍保持在85％以上。其工業(yè)應(yīng)用前景良好。
　　 通過進(jìn)一步的篩選工作，獲得了優(yōu)良重組里氏木霉轉(zhuǎn)化子HC6和Cel9，對其產(chǎn)酶性能進(jìn)行了研究。在此基礎(chǔ)上，對幾種不同來源的中性纖維素酶的性能及其在牛仔服水洗整理中的應(yīng)用效果進(jìn)行了比較研究。試驗(yàn)結(jié)果表明:中性纖維素酶用于牛仔服水洗整理，可以明顯降低靛藍(lán)的反沾色，其整體水洗效果好于酸性纖維素酶，具有良好的工業(yè)應(yīng)用前景。