茄尼醇提取純化及其與HSA的相互作用研究.pdf

1、茄尼醇是一種九聚異戊二烯醇，廣泛存在于茄科植物中，含量以煙葉中最多，是合成輔酶Q10和維生素K2的必要原料，其本身也具有抗菌消炎的功效。本課題以廢次煙葉為原料建立了一套包括提取、皂化、結(jié)晶、樹脂純化等工藝的茄尼醇提取與純化方法。以茄尼醇的提取率和粗品純度為考察目標(biāo)，采用有機溶劑熱提取方法，確定了適宜的提取條件為：提取劑正己烷、液固比14:1、浸取溫度50℃、搖床頻率175rpm、原料粒度20-40目。在此條件下提取率為91.42％，浸膏

2、純度為18.05%。為強化提取效果，采用了超聲輔助提取和氨浸預(yù)處理輔助提取新工藝，與傳統(tǒng)有機溶劑熱提取效果對比，超聲輔助提取明顯縮短了提取時間，而氨浸輔助提取提高了提取率和粗品純度。
　　以所得粗品浸膏為原料，研究了堿法、酶法皂化方法，轉(zhuǎn)化結(jié)合態(tài)茄尼醇為游離態(tài)，提高了茄尼醇收率。結(jié)果顯示堿法皂化可使茄尼醇純度由18.05%提高到28.14%。進一步選擇甲醇作為溶劑進行重結(jié)晶純化，兩次結(jié)晶純度可達65.96%，4次重結(jié)晶，茄尼醇純度

3、可達91.85%。以65.96%茄尼醇為原料，利用NKA大孔吸附樹脂動態(tài)吸附，乙醇等度洗脫，可得純度為83%的產(chǎn)品。
　　在得到高純產(chǎn)物后，利用綜合光譜學(xué)方法（紫外可見吸收、熒光和同步熒光光譜、圓二色光譜）以及位點標(biāo)記方法，在模擬人體環(huán)境下，系統(tǒng)、量化地研究了茄尼醇與人血清白蛋白（HSA）的相互作用機理。利用熒光光譜數(shù)據(jù)，計算了結(jié)合常數(shù)和熱力學(xué)參數(shù)（ΔH，ΔS，ΔG），進而通過對熱力學(xué)參數(shù)的分析得出，結(jié)合過程都是自發(fā)的，起主導(dǎo)作用

4、的結(jié)合力為氫鍵或者范德華力。利用紫外可見吸收、圓二色光譜分別分析了茄尼醇與HSA結(jié)合后，對HSA氨基酸殘基附近微環(huán)境以及α螺旋等結(jié)構(gòu)的影響。選用華法林、布洛芬、地高辛三種位點標(biāo)記物進行了位點競爭實驗，結(jié)果顯示，HSA結(jié)構(gòu)中位點siteI（subdomainIIA）是其與茄尼醇的首要結(jié)合位點。根據(jù)能量傳遞理論，計算出了茄尼醇-HSA的結(jié)合距離（4.29nm），能量傳遞的發(fā)生具有很高的可能性。
　　利用同樣方法，考察了茄尼醇的重要衍生