卵黃高磷蛋白的磁性分離及其與白藜蘆醇相互作用研究.pdf

1、卵黃高磷蛋白是蛋黃中主要的磷蛋白，具有許多優(yōu)良的物化和生物學(xué)特性。常用的提取分離方法需要經(jīng)過鹽析粗提蛋白，層析純化蛋白等過程，持續(xù)操作時間長。由于功能性磁性納米粒子具有磁性核體材料的磁響應(yīng)性和表面殼體材料的功能性，可以在外加磁場的作用下快速方便地從反應(yīng)體系中分離目標(biāo)分子。因此，本課題采用磁性納米粒子分離技術(shù)，建立了一種新型的卵黃高磷蛋白提取方法，并通過熒光光譜法等研究白藜蘆醇與卵黃高磷蛋白相互作用。論文主要研究結(jié)論如下：
　　通過

2、化學(xué)沉淀法制備出Fe3O4，表面修飾3％的硫酸軟骨素鈉和Fe3+得到目標(biāo)磁性納米粒子CMNP@Fe3+。透射電子顯微鏡表征其表面形態(tài)顯示CMNP@Fe3+呈圓球形，粒徑為20 nm，分散性較好。磁滯回線結(jié)果表明具有超順磁性；傅里葉紅外光譜表明硫酸軟骨素鈉和 Fe3+已經(jīng)成功修飾在磁性粒子表面；通過原子吸收光譜檢測并計算出納米粒子表面Fe3+修飾量為152.0 mg/g。
　　比較磁性粒子對三種不同前處理粗蛋白吸附量，選擇熱輔助鹽析

3、粗蛋白為提取卵黃高磷蛋白的底物。利用納米粒子表面 Fe3+與卵黃高磷蛋白的強(qiáng)結(jié)合力，建立從蛋黃中磁性分離卵黃高磷蛋白的新方法。最優(yōu)的提取條件為：在pH4.0的10 mg/mL粗蛋白醋酸-醋酸鈉溶液中，加入磁性納米粒子CMNP@Fe3+，最終濃度為4 mg/mL，混勻后于30℃恒溫?fù)u床中吸附180 min，利用外加磁場將磁性納米粒子分離，水洗數(shù)次后，加入pH8.0的2 mol/L咪唑-NaCl溶液，37℃恒溫?fù)u床上洗脫2 h。上層洗脫液經(jīng)

4、過透析后冷凍干燥，得到卵黃高磷蛋白。
　　利用動力學(xué)模型和等溫吸附模型擬合，確定磁性納米粒子 CMNP@Fe3+吸附卵黃高磷蛋白的過程符合偽二級動力學(xué)模型和 Freundlich等溫吸附模型。吸附過程是靜電作用為主的吸熱過程；卵黃高磷蛋白的最大理論吸附量為625.00 mg/g。紅外光譜和非變性凝膠電泳結(jié)果表明，利用磁性分離的卵黃高磷蛋白，純度較高。
　　研究了白藜蘆醇和卵黃高磷蛋白的相互作用。發(fā)現(xiàn)卵黃高磷蛋白的熒光發(fā)射峰強(qiáng)

5、度減弱并出現(xiàn)位移現(xiàn)象。計算出25℃和35℃下相互作用體系的猝滅常數(shù)分別為1.12×104 M-1、9.4×103 M-1，確定為靜態(tài)猝滅機(jī)理；白藜蘆醇與卵黃高磷蛋白的結(jié)合常數(shù)為1.80×104M-1(25℃)、結(jié)合位點數(shù)約為1和熱力學(xué)參數(shù)分別為?G<0、?H=53.50 kJ/mol、?S=261.00 J/mol·K，由此判定二者之間主要以疏水相互作用為主，是一個吸熱的自發(fā)結(jié)合過程。卵黃高磷蛋白的添加能夠提高白藜蘆醇的溶解性，但對DP