脆壁克魯維酵母(Kluyveromyces fragilis)生產(chǎn)乳糖酶的研究.pdf

1、β-半乳糖苷酶(β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，β-D-galactoside galatohydrolase，EC3.2.1.23)通常被稱為乳糖酶(Lactase)。該酶能將乳糖水解為半乳糖和葡萄糖，并具有半乳糖苷的轉(zhuǎn)移作用。利用乳糖酶生產(chǎn)低乳糖乳及乳制品是解決乳糖不耐受癥問題的有效途徑之一，具有重要的實際價值和理論意義。
　　對一株應(yīng)用于生產(chǎn)中的脆壁克魯維酵母LSF-0612及其生產(chǎn)的乳糖酶進行了相關(guān)的研究，包括種子培養(yǎng)基的優(yōu)

2、化、發(fā)酵培養(yǎng)基與發(fā)酵條件的優(yōu)化、酶學(xué)性質(zhì)的分析和乳糖水解試驗。
　　通過對種子培養(yǎng)相關(guān)的單因素試驗和正交試驗，確定了種子培養(yǎng)的最佳種子培養(yǎng)基組分為:葡萄糖4％、酵母浸粉4％、氯化錳0.5mmol/L，培養(yǎng)時間24h，在此條件下菌體濕重可達到1.79g/100ml。
　　通過對液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶相關(guān)的單因素及正交試驗，確定出液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組分為:乳糖4％，酵母浸粉3％，氯化錳1mmol/L。最佳發(fā)酵條件為:接種量10％，溫度2

3、8℃，初始pH7.0，搖床轉(zhuǎn)數(shù)180r/min，培養(yǎng)時間36h。在此條件下的液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶，可使細(xì)胞內(nèi)酶活高達1100U/ml，或者換算為4140U/g干菌體。
　　通過對脆壁克魯維酵母LSF-0612乳糖酶的酶學(xué)性質(zhì)的分析結(jié)果表明:該酶的最適反應(yīng)溫度為40℃，在40℃條件下放置2h酶活還能達到90％以上;酶液在4℃條件下保存一個月才出現(xiàn)較為明顯的酶活下降趨勢;該酶的最適反應(yīng)pH是7.0，pH的穩(wěn)定范圍在6.5-7.5。