乳酸克魯維斯酵母（Kluyveromyces lactis）乳糖酶基因的克隆、表達及酶學性質分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、西南農業(yè)大學碩士學位論文乳酸克魯維斯酵母（Kluyveromyceslactis）乳糖酶基因的克隆、表達及酶學性質分析姓名：劉愛兵申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：李名揚張偉20040501ThesisofmasterdegreeofSWAUABSTRACTCloningandexpressionofthelactasegenefromKluyveromyceslactisandanalysisoflactasepropert

2、iesCandidate:LiuAibingAdvisor:Prof.LiMingyangViceProf.ZhangWei(CollegeofHorticultureandGardenSouthwestAgriculturalUniversityChongqing400716)ABSTRACTdDgalactosidegalactohydrolase(EC3.2.1.23)isusualynamedlactasewhichcanhyd

3、rolyzelactoseintogalactoseandglucoseandalsocantransfergalactoside.lactaseismainlyusedinimprovingdairyproductsandproducingoligogalactoseaswellasintheresearchrelatedtoproteinsynthesisandheredityfactor.Solactaseisvaluablein

4、theoryandpractice.AlpresentmostoflactasesusedinindustryproductioncomefromKhryveromycesAspergillusnigerandAspergillusoryzaeThelactasegenefromKluyveromyceslactiswasresearchedinthethesis.TheclonedgenewasexpressedinE.coliand

5、thepropertiesoflactasewasdeterminated.InadditionwestudiedtheexpressionoflactasegeneinthemethylotrophicyeastPichiapastorisThemainexperimentsandresultswereasfolows:1.CloningandinE.colioflactase.Specificprimersweredesigneda

6、ccordingtothesequenceofthebetagahtctosidasegenefromKluyveromyceslactis.MacgenewasamplifiedbyPCRandsubsequen勿cloned.MacgenewasligatedtothepEr30a()vectorforexpression.ThentherecombinantplasmidpFnac4wastransformedintoE.coli

7、BL21.ThepositivetransformantswereinducedatdiferenttemperatureforthreehoursbyIPTGwiththefinalconcentrationof1mM.SDSPAGEanalysisandlactaseactivityassayshowedthatMacgenewasexpressedinE.coliandthattheexpressionlevelat280Cwas

8、muchhigherthanthatat371C.Theformerwas0.475Umlandthelaterwas0.134UmL.2.DeterminationofthepropertiesoflactaseedinE.coli.PreparingthelactasesolutionexpressedinE.coliwedeterminatedtheoptimumpHpHstabilityoptimumreactiontempre

9、turethermalstabilityefectofmetalionsandchemicalreagentKandV_.ItsoptimumpHwas5.8and6.4to7.5andtheoptimumtempreturewas45Cto52C.Ithadbetterbasicitytoleranceandworseaciditytolerance.SothelactasewassuitabletowheyatpH7.0butcou

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