黑曲霉果膠酯酶的分離純化及其固定化技術(shù)的研究.pdf

1、西華大學(xué)碩士學(xué)位論文黑曲霉果膠酯酶的分離純化及其固定化技術(shù)的研究姓名：焦云鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：王志民20050501本論文對(duì)黑曲霉果膠酯酶做以下三個(gè)方面的研究：(1)黑曲霉果膠酯酶發(fā)酵動(dòng)態(tài)學(xué)的研究(2)黑曲霉果膠酯酶分離純化的研究(3)黑曲霉果膠酯酶的固定化以及固定化酶酶學(xué)性質(zhì)的研究。研究結(jié)果如下：(I)分別研究了黑曲酶(AS3324J的固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵效果并對(duì)液態(tài)發(fā)酵進(jìn)行優(yōu)化：通氣量、接種量、培養(yǎng)周期等條件對(duì)

2、黑曲霉As3324產(chǎn)生果膠酯酶的影響。研究發(fā)現(xiàn)：以有機(jī)氮為氮源的液態(tài)發(fā)酵優(yōu)于無(wú)機(jī)氮作為氮源的液態(tài)發(fā)酵和固態(tài)發(fā)酵的效果：固態(tài)發(fā)酵中果膠作為誘導(dǎo)物的發(fā)酵效果優(yōu)于未經(jīng)果膠誘導(dǎo)的；相同條件下，固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)周期短。而液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)周期長(zhǎng)；液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化發(fā)現(xiàn)；黑曲霉(AS3324)接種量03ml(3103個(gè)孢子)，轉(zhuǎn)速90轉(zhuǎn)／分，30℃下發(fā)酵4天時(shí)果膠酯酶活力最大為902個(gè)單位鷹升培養(yǎng)基。(2)黑曲酶發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨分級(jí)鹽析、DEAESephad

3、exA50離子交換層析后果膠酯酶得到純化，同時(shí)對(duì)商品果膠酶進(jìn)行研究，從中同樣分離純化出果膠酯酶。兩種來(lái)源的果膠酯酶電泳檢測(cè)均只有一條帶，達(dá)電泳純。(3)研究了明膠固定化果膠酯酶的最佳條件并對(duì)固定化酶和液體酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了比較。研究發(fā)現(xiàn)：明膠固定化果膠酯酶的最佳條件是：明膠15％，戊二醛5％，用酶量015ml，緩沖液pH40。液體酶經(jīng)固定化后酶的性質(zhì)發(fā)生改變，最適溫度是由40℃上升到45℃，最適pH44降到pH40，Kin值由0017％

4、降到00014％；pH穩(wěn)定性、溫度溫度性、操作穩(wěn)定性和貯存穩(wěn)定性增強(qiáng)：pH穩(wěn)定范圍從28～56增加到28～6O，固定化酶在50℃下保溫3h后酶活保留86％。4℃貯存16天后酶活保留9015％，被反復(fù)利用6次后酶活仍保存8099％，半衰期是11，7天。固定化酶和游離酶作用4h后均能將高酯果膠轉(zhuǎn)化為低酯果膠，但隨時(shí)間的延長(zhǎng)，游離態(tài)果膠酯酶活性逐漸喪失，其催化作用也就逐漸喪失，而固定化酶作用6h后，果膠酯酶仍具有活性，將甲氧基含量降到314％